手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
體內(nèi)藥物分析是對體液或組織中藥物及其代謝物、生物標記物等進行的定性或定量分析。生物樣品成分復雜，因此分析物檢測手段的選擇成為需要密切關注的問題。反相液相色譜(RPLC)是當前分離分析和分離制備中應用的色譜模式，其依靠疏水固定相與溶質(zhì)之間的疏水相互作用實現(xiàn)弱極性和中等極性化合物的分離。生物基質(zhì)中含有其他多種親水性組分，包括內(nèi)源性物質(zhì)以及外源性物質(zhì)，當目標化合物在反相色譜保留較弱時，可能會與這些成分發(fā)生共洗脫。對強極性化合物的保留很弱，甚至不保留，因此強極性化合物在上不能得到很好的分離。目前，用來分離強極性化合物的液相色譜方法主要有離子交換色譜法(IEC)、正相色譜法(NPLC)和親水作用色譜法(HILC)。
親水作用色譜(HILIC)的概念是由 Alpert提出，它是指采用極性固定相 (如硅膠或衍生硅膠) 和含高濃度極性有機溶劑(如乙腈)和低濃度水溶液流動相的色譜模式，具有和反相色譜正交的選擇性所使用的流動相與傳統(tǒng)反相色譜相似，弱洗脫劑為有機相，強洗脫劑為水相，可達到與反相色譜相媲美的柱效和對稱峰形，化合物的洗脫順序則與正相色譜相似，即以親水性增加的順序流出，能為親水性強極性的化合物提供合適的保留，含水的流動相又可顯著改善樣品的溶HILIC分離系統(tǒng)包括極性固定相和流動相包括高濃度強極性溶劑低濃度和水。HILIC對極性化合物的良好保留和*選擇性，已使其成為體內(nèi)藥物定量分析的重要補充工具。
未經(jīng)衍生化的普通硅膠柱目前是應用的HILIC 色譜柱，對于堿性藥物，需要酸性的流動相，未衍生硅膠柱在HILIC 模式下因處于高有機相環(huán)境中，不會如處于反相色譜條件時那樣易溶解。同時，HILIC 還能獲得高的色譜柱效對稱的峰形。HILIC以高濃度有機溶劑和低含量水組成的流動相，具有低黏度和高滲透性的特點，與相似柱粒徑和流速的反相液相色譜相比，色譜柱壓大大降低，因此可在高流速下以低反壓進行分離，從而實現(xiàn)快速分析。HILIC 所使用的高揮發(fā)性有機相尤其適宜與電噴霧( ESI ) 質(zhì)譜聯(lián)用，可提供良好的靈敏度。由于HILIC 進樣時采用高比例有機溶劑，生物樣品制備過程zui后一步無需以高水相有機溶劑復溶，可有效提高樣品通量，對不穩(wěn)定或不適合蒸發(fā)復溶的分析物還可得到更低的檢出限和更高的回收率。由于HIL IC利用被測組分與硅羥基的相互作用,因此不需要加離子對試劑(如烷基磺酸鹽)的洗脫液就能對大范圍內(nèi)的堿性藥物進行分離,流動相組成簡單,一般為甲醇-水相緩沖液或乙腈-水相緩沖液,常用的緩沖液有硝酸銨--氨水、乙酸銨-乙酸/甲酸/三氟乙酸及磷酸鹽/磷酸等。HILIC的流動相組成簡單，固定相穩(wěn)定。
色譜條件與樣品前處理中所用有機溶劑兼容，可節(jié)約大量樣品前處理時間，并與質(zhì)譜尤其是 離子源質(zhì)譜良好兼容，適用于藥物研發(fā)中藥理毒理學評價藥 代動力學研究治療藥物監(jiān)測和臨床診斷研究中的高通量分析 實際上， HILIC的應用領域已不再局限于極性小分子藥物及代謝物，相對非極性的化合物和多肽蛋白類藥物的成功分析亦見報道通過構建新型流路， HILIC與反相色譜的離線或在線結合應用可極大提高對復雜體系樣品的分離效率，尤其適合代謝組學研究具有*選擇性的新型填料不斷面世，提供了更高的柱效更廣的選擇性和更好的耐用性 亦有采用固定相作為填料的報道，HILIC對復雜基質(zhì)中親水性樣品進行除鹽等預處理近年來，可用于HILIC 分離的毛細管整體柱和微控流芯片等新技術不斷興起，拓寬了 HILIC的應用領域有研究發(fā)現(xiàn)流動相如使用含高濃度二氧化碳的乙醇-水體系，能達到與高污染的傳統(tǒng)乙腈水體系相似的色譜表現(xiàn)，在化學研究更加關注環(huán)保的今天具有重要啟發(fā)意義。
目前，HILIC模式的分離機理還不是十分明確，HILIC存在著多種復雜的相互作用。此外，對主要的 HILIC色譜柱進行系統(tǒng)的色譜評價也是推廣HILIC 應用的基礎，但是當前缺乏的評價方法和評價樣品。色譜柱生產(chǎn)商評價色譜柱時所選擇的樣品也不盡相同，大多數(shù)只是給出少數(shù)幾個樣品的柱效，不能全面地反映色譜柱的特性。隨著HILIC 在體內(nèi)藥物分析應用逐漸廣泛,需要建立包含幾種典型極性(親水)物質(zhì)的 HILIC色譜柱“評價樣品體系”，為HILIC 應用中色譜柱的選擇提供參考以及系統(tǒng)研究并闡明其分離機制將是今后的重要研究課題之一。
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉載、摘編或利用其他方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的，應在授權范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
- 本網(wǎng)轉載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關權利。
采購中心