細(xì)胞名稱  人胚肺成纖維細(xì)胞；CCC-HPF-1培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣　

生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)　

特征特性 取材自引產(chǎn)的15周胚胎組織，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心建立。

培養(yǎng)條件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS  

傳代方法 1：

3傳代；3~4天1次。  

傳代情況 P9

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）　

STR Amelogenin：X，Y；CSF1PO：12；D13S317：8；D16S539：12；D18S51：13,20；D19S433：14.2,16.2；D21S11：29,32.2；D2S1338：19,20；D3S1358：14,15；D5S818：12,13；D7S820：10；D8S1179：13,14；FGA：21，23；TH01：7，9；TPOX：9,10；vWA：16；　

同工酶

染色體 46,XY

使用權(quán)限 A類
人胚肺成纖維細(xì)胞；CCC-HPF-1培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
ANG-2 ELISA Kit 大鼠血管生成素2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-AR/FITC 熒光素標(biāo)記雄激素受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FAM161B FAM161B蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

AIF ELISA Kit 大鼠凋亡誘導(dǎo)因子 96T

(2F11) 英文名稱： 單克隆抗體 0.1ml

phospho-alpha 1 Sodium Potassium ATPase (Tyr260) 英文名稱： 磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體 0.1ml

Anti-AR/FITC 熒光素標(biāo)記雄激素受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
重組K3蛋白 重組K3蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-IL-2R gamma/CD132 白介素2受體γ鏈抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PAK2 p21激活激酶2抗體 規(guī)格 0.1ml

ACRV1 Kit Human 人 ACRV1 ELISA配對(duì)抗體 ELISA

TSPAN3 英文名稱： 四分子交聯(lián)體3抗體(四旋蛋白) 0.2ml

CNTNAP4 英文名稱： 接觸蛋白相關(guān)蛋白4抗體 0.1ml

Anti-IL-2R gamma/CD132 白介素2受體γ鏈抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
脂氧素B4(Lipoxin B4)ELISA試劑盒通用96T1.56-100 ng/mL大鼠腫瘤壞死因子γ(TNF-γ)ELISA試劑盒，英文名：TNF-γ ELISA KiISA Kit for Human C-C chemokine receptor type 1小鼠白介素35(IL-35)ELISA試劑盒，英文名：IL-35 ELISA KiISA Kit for Human C-opeptide of Collagen alpha-1(I) chain小鼠B細(xì)胞淋巴瘤-XL(Bcl-xl)ELISA試劑盒，英文名：Bcl-xl ELISA KiISA Kit for Human Dimethylglycine dehydrogenase, mitochondrial小鼠棕櫚?；さ鞍?(MPP6)ELISA試劑盒，英文名：MPP6 ELISA KiISA Kit for Human Serine/threonine-protein kinase/endoribonuclease IRE1小鼠硝基(NT)ELISA試劑盒，英文名：NT ELISA KiISA Kit for Human Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A小鼠上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)ELISA試劑盒，英文名：CDHE ELISA KiISA Kit for Human Gremlin-1小鼠醌NADH脫氫酶1(NQO1)ELISA試劑盒，英文名：NQO1 ELISA Kit

人胃脂肪酶(LIPF)ELISA試劑盒人96T31.2-2000 pg/mL大鼠血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒，英文名：aGT 英文名：GS ELISA KiISA Kit for Human Interferon-induced transmembrane protein 3小鼠補(bǔ)體成分4b(C4b)ELISA試劑盒，英文名：C4b ELISA KiISA Kit for Human Immunoglobulin A小鼠N-乙酰半乳糖胺酶α(NAGα)ELISA試劑盒，英文名：NAGα ELISA KiISA Kit for Human Kallikrein-2大鼠腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KISS1蛋白(KISS1/Kisspeptin 1)ELISA試劑盒，英文名：KISS1/Kisspeptin 1 ELISA KiISA Kit for Human Leukemia inhibitory factor receptor大鼠血管生成素受體Tie1(ANG-R-Tie1)ELISA試劑盒，英文名：ANG-R-Tie1 ELISA KiISA Kit for Human Max dimerization protein 1大鼠瘦素(Leptin)ELISA試劑盒，英文名：Leptin ELISA Kit
總RNA抽提試劑 100ml 國(guó)產(chǎn)

ZA20D3 英文名稱： 鋅指蛋白20D3抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-CREB-1(Ser142) 磷酸化CREB-1抗體 規(guī)格 0.1ml

phospho-GSK3 Alpha/ Beta(alpha + beta)(phospho Tyr279 + Tyr216) 磷酸化葡萄糖合成激酶3α/β抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

DLX2 英文名稱： 同源轉(zhuǎn)錄因子DLX2抗體 0.2ml

SCARB2 LIMP-2 / SCARB2 / CD36L2 兔單抗 (PE) Mouse
Apo-H(Mouse Apolipoprotein H) ELISA Kit 小鼠載脂蛋白HMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-CASP4/FITC 熒光素標(biāo)記半胱胺酸蛋白酶蛋白-4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh ELOVL2 長(zhǎng)鏈脂肪酸延長(zhǎng)酶ELOVL2抗體 規(guī)格 0.2ml

(ADAM9)ELISA Kit 大鼠解整合素樣金屬蛋白酶9 96T

Myozenin 1 英文名稱： MYOZ抗體 0.2ml

phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305) 英文名稱： 磷酸化蛋白激酶B抗體 0.1ml

Anti-CASP4/FITC 熒光素標(biāo)記半胱胺酸蛋白酶蛋白-4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。