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            化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>行業(yè)專用試劑>血清> 多克隆抗體制備服務(wù)

            多克隆抗體制備服務(wù)

            參考價(jià) 8000
            訂貨量 ≥1
            具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
            • 公司名稱 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司
            • 品牌 其他品牌
            • 型號(hào)
            • 產(chǎn)地
            • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
            • 更新時(shí)間 2024/8/30 15:58:43
            • 訪問(wèn)次數(shù) 2228

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            上海研謹(jǐn)生物科技有限公司提供RT-PCR技術(shù)服務(wù)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)、原位雜交技術(shù)服務(wù)、免疫沉淀技術(shù)服務(wù)、Western Blotting技術(shù)服務(wù)、PCR實(shí)驗(yàn)服務(wù),并為廣大科研用戶提供各種高品質(zhì)的化學(xué)試劑、生物學(xué)試劑、免疫學(xué)檢測(cè),ELISA試劑盒、生化試劑盒、分析標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)食品安全檢測(cè)試劑、動(dòng)物疫病類檢測(cè)產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)等,應(yīng)用覆蓋藥物分析領(lǐng)域、食品安全領(lǐng)域、聚合物研究領(lǐng)域、環(huán)境監(jiān)測(cè)領(lǐng)域,客戶廣泛分布于食品、制藥、第三方檢測(cè)、環(huán)境測(cè)試機(jī)構(gòu)、化工、科研院校、生物工程等行業(yè)。

            針對(duì)以上各項(xiàng)服務(wù),我們均有豐富服務(wù)經(jīng)驗(yàn)和深厚專業(yè)背景的人員團(tuán)隊(duì)為您提供技術(shù)和支持。上海研謹(jǐn)生物擁有充滿活力的團(tuán)隊(duì),持續(xù)創(chuàng)新,致力于為客戶提供高質(zhì)量產(chǎn)品和優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。




            各種實(shí)驗(yàn)代做:WB代做,免疫組化,PCR代做,細(xì)胞檢測(cè),食品安全檢測(cè)試劑,獸藥殘留檢測(cè)試劑,動(dòng)物疫病類檢測(cè),銷售高品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)照品,ELISA試劑盒,細(xì)胞,血清,等等

            供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)

            服務(wù)名稱:  多克隆抗體制備服務(wù)

            提供商:      上海研謹(jǐn)生物

            規(guī)格:        實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)

            多克隆抗體制備服務(wù)

             

             

             

             

             

             

            多抗一般制備流程:*抗原的準(zhǔn)備- +兔子的免疫-→ 效價(jià)檢測(cè)和終放- +抗體親和純化- +抗體的濃縮和保存。

             

            具體實(shí)驗(yàn)步驟如下:

            1.兔子的準(zhǔn)備

            挑選健康的6周大小的新西蘭大白兔兩只(約2Kg) ,使其適應(yīng)新的生活環(huán)境,至少穩(wěn)定幾天再進(jìn)行*取血、預(yù)采血(作陰性參照用)

            1.1將兔子小心的放入固定的架中,使兔子平靜;

            1.2小心剃去兔耳上的毛以使血管清晰可見(jiàn)(也可不剃);

            1.3如果有必要,可用小棉球沾酒精涂抹血管部位使血管膨脹;

            1.4用注射器從耳靜脈抽取約10ml血液(約5ml血清);

            1.5小心抽出針頭,適當(dāng)按壓傷口以免流血,然后用酒精棉球消毒傷口;

            1.6將收集的血液置于37 C滅活30min,后置于4" C過(guò)夜使其凝結(jié)釋放血清;

            1.7將凝結(jié)好的血液在10000r / min離心10min; h.收集 上清,即為血清。

            2.兔子的免疫

            2.1注射兩只兔子的抗原為1ml,抗原緩沖溶液必須不含對(duì)兔子有害的化學(xué)試劑每只兔子初次免疫400ug抗原比較適合,也可適當(dāng)減少以獲得更好的結(jié)果,后續(xù)免疫每次為100ug即可。

            2.2將1m的佛氏*佐劑與準(zhǔn)備好的1m抗原充分混勻,呈乳白色; .

            2.3小心從籠中取出兔子,織兔子免疫4個(gè)部位(背部和大腿根部均可),每個(gè)部位250ul,針頭呈45度角插入皮下1-2cm,注射完后停留數(shù)秒以防止抗原外流。

            2.4兔疫周期為20天,免疫完后7-10天取血(包括中途測(cè)試取血和終放血),總共免疫4-5次。

             

            3.效價(jià)檢測(cè)

            3.1 2個(gè)參照陰性參照為預(yù)取血血清,均以1抗起始濃度稀釋(封閉稀釋液);陽(yáng)性參照為以前

             

            陽(yáng)性血清

            3.2于96孔板中每孔滴加100ul, 1ug/m抗原,于49C過(guò)夜, 也可以37°C孵育2小時(shí)。

            3.3倒掉抗原溶液,每孔加入200u的封閉液, 49C過(guò)夜或者379C孵育2小時(shí)。

            3.4倒去封閉液,在吸水紙上拍打盡量吸干殘留液體,用洗滌液洗板三次每次盡量拍干殘留液體,若要放置一段時(shí)間, 37°C烘干并用封口袋封好于20°C存放。

            3.5取包被好的96孔板,第---孔加入陰性 參照液100ul,第二孔加入陽(yáng)性參照液100ul,第三孔加入1:500的待測(cè)抗血清,后續(xù)各孔在此基礎(chǔ)上倍比稀釋,于37°C孵育1 小時(shí)。

            3.6倒掉液體,用洗滌液洗板三次,拍干。每孔加入100u的HRP標(biāo)記的小鼠抗兔lgG (1: 2000稀釋),于37°C孵育45分鐘。

            3.7倒掉液體,用洗滌液洗板三次,拍干。每孔加入100u的TMB底物(Sigma 單組份TMB ) 37°C孵育5-20分 鐘(根據(jù)顏色深淺來(lái)決定顯色的時(shí)間)。

            3.8每孔加入50u的終止液(2N H2SO4), 在酶標(biāo)儀上讀取波長(zhǎng)450nm處的吸光值。

            抗體效價(jià)檢測(cè)達(dá)到100萬(wàn)以上后可以對(duì)兔子進(jìn)行終放血??贵w的純化

             

            4.抗體的親和--親和柱的制備

            4.1 稱取1mg CNBr- Sepherose 4B的瓊脂糖凝膠加入2mmol/ L的鹽酸中,4" C過(guò)夜使其充分溶漲,可獲得3m溶漲膠。

            4.2將凝膠轉(zhuǎn)移入純化柱中,用約20ml 2mmol / L的鹽酸洗介質(zhì)3次。

            4.3用偶聯(lián)緩沖液洗介質(zhì)- -次,因?yàn)榛罨鶊F(tuán)在偶聯(lián)緩沖液PH值下易水解,所以此步驟在幾分鐘內(nèi)完成。

            4.4將溶解在5ml偶聯(lián)緩沖液中的5-10mg的抗原加入凝膠中

            4.5室溫下輕輕混合搖動(dòng)2-4小時(shí),或4" C過(guò)夜,如需測(cè)定結(jié)合效率此步驟結(jié)束后取少量溶液待測(cè)。用20ml的偶聯(lián)緩沖液洗介質(zhì)一-次。

            4.6加入15m1 1% BSA溶液室溫下孵育2小時(shí)或4" C過(guò)夜。

            4.7用磷酸鹽緩沖液洗滌介質(zhì)3次以上,每次15m以上h.

            4.8抗原固相化完成,可用于純化。

            4.9若不立即使用或者使用后,用20%的乙醇封存。

             

            5.抗血清的純化和保存

            5.1抗血清用PBS等體積稀釋,5000-10000 / min離心15分鐘,取上清.

            5.2用10倍體積的PBS清洗抗原親和柱以平衡柱子。

            5.3將稀釋好的抗血清10m加入平衡好的柱子中。

            5.4室溫下輕輕混合搖動(dòng)2-4小時(shí),或4" C過(guò)夜

            5.5用10倍體積的PBS清洗抗原柱,以洗去結(jié)合在柱子上的雜蛋白

            5.6用2倍體積的抗體洗脫液洗滌柱子,以得到特異性抗體

            5.7用10倍體積PBS平衡柱子

            5.8用20%的酒精封存柱子,4'C保存。

            在得到洗脫的抗體后,經(jīng)蔗糖或聚乙二醇濃縮后于PBS中透析除鹽,使用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在波長(zhǎng)280nm處測(cè)定抗體OD值,所得OD值除以1.35即為所測(cè)抗體的濃度,添加40-50%甘油置于20^C可長(zhǎng)期保存。

             

             

            實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

            ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

            CCK8檢測(cè)

            基因組DNA提取

             

            蛋白相互作用分析

            Western Blot

            免疫組化

            熒光定量PCR

            動(dòng)物模型服務(wù)

            流式細(xì)胞檢測(cè)

            ROS氧化分析

            激光共聚焦

            DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

            細(xì)胞劃痕

            鈣離子濃度檢測(cè)

            掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

            microRNA測(cè)序

            動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

            探針合成

            ATP/ADP檢測(cè)

            石蠟/冰凍切片

            定點(diǎn)突變

            線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)

            細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

            藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

             

            免疫共沉淀

            真核表達(dá)載體構(gòu)建

            染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

            非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)



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