轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)
- 公司名稱 上海滬崢生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2024/8/26 9:48:51
- 訪問次數(shù) 5779
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | HXG740 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研使用 |
轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)
產(chǎn)品名稱】
通用名稱：轉(zhuǎn)基因大豆 MON87705 品系核酸檢測試劑盒 (熒光-PCR 法)
Name ：Diagnostic Kit for MON87705 Gene DNA (Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】50T/盒
本試劑盒適用于檢測轉(zhuǎn)基因植物的 MON87705 基因，用于篩查待檢測植物中是否含有 MON87705 成分。其檢測結(jié)果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用國家標準的 MON87705 特異性引物和探針，用熒光 PCR 技術(shù)進行轉(zhuǎn)基因成分的檢測。
【試劑組成】
名 稱 | 規(guī) 格 |
酶液 | 50μL×1 管 |
MON87705 反應(yīng)液 | 500μL×2 管 |
MON87705 陽性質(zhì)控品 | 50μL ×1 管 |
陰性質(zhì)控品 | 250μL ×1 管 |
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】
-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融，反復凍融次數(shù)不超過 5 次。有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】稱取 200g 樣品。【保存和運輸】
上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應(yīng)采用 0℃。
轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理
固體樣本：用粉碎機或冷凍研磨儀將樣品研磨至細粉狀。
1.2 DNA 提取
對于固體標本，DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法：
1) 每個樣品取 2 個平行管。稱取 200mg 粉碎的樣品，加入 1mL 預冷至 4℃的抽提液，劇烈搖動混勻后，在冰上靜止 5min，4℃條件下 10000g 離心 15min，棄上清液；
2) 加入 600μL 預熱至 65℃的裂解液，充分重懸沉淀，在 65℃恒溫保持 40min， 期間顛倒混勻 5 次；
3) 室溫條件下10000g 離心10min，取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中，加入5μLRNAseA， 37℃恒溫 30min，分別用等體積苯酚：異戊醇溶液：異戊醇溶液各抽提一次；
4) 室溫條件下，10000g 離心 10min，取上清液至新離心管，加入三分之二體積的異丙醇，十分之一體積的 3mol/L 的乙酸鈉溶液（pH=6.5），-20℃放置 2-3h；
5) 在 4℃條件下，10000g 離心 15min，棄上清液，用 70%乙醇洗滌沉淀一次，倒出乙醇，晾干沉淀；
6) 加入 50μL TE（pH8.0）溶解沉淀，所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA 提取試劑盒。
油脂樣本請直接選用市售油脂 DNA 提取試劑盒，按說明操作。
2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）
根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 | MON87705 反應(yīng)液 | 酶液 |
用量 | 20μL | 1μL |
3. 加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；
1.1 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；熒光通道選擇： 檢測通道
（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）選擇 NONE，請勿選擇 ROX 參比熒光。
1.2 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
步驟 | 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法) 結(jié)果分析判定
結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析，當曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果。
結(jié)果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；
可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤ 38，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；
陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。
3. 質(zhì)控標準
陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示；
陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效。
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