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            蛋白雙向2D-WB 電泳實驗服務(wù)

            具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

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              上海研謹(jǐn)生物科技有限公司成立于2011年,多年來我們專注于生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
             
              研謹(jǐn)生物依托自身成熟高效的技術(shù)服務(wù)平臺、專業(yè)的技術(shù)服務(wù)團(tuán)隊,可以按您的課題資料提供科學(xué)完善的實驗設(shè)計方案、客觀真實的實驗結(jié)果、完整詳實的實驗結(jié)果報告單。如果您受時間、 試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎.您與我們聯(lián)系。“方便、 準(zhǔn)確、快捷是我們的宗旨,我們將用-流的服務(wù)為您解決實驗中的問題!希望我們能成為您值得信賴的科研合作伙伴。
             
              為了更好、更高效的服務(wù)廣大及科研工作者,2018年我們成立了杭州研謹(jǐn)生物子公司。
             
              “方便、 準(zhǔn)確、快捷是我們的宗旨,我們將用-流的服務(wù)為您解決實驗中的問題!
             
              未來公司也將一如既往地,以更好的產(chǎn)品、更高的質(zhì)量、更優(yōu)的服務(wù)回饋每一個客戶。研謹(jǐn)期待與您的合作!
             

            wb代做,蛋白雙向(2-D)電泳,半定量RT-PCR,PKC活性檢測,明膠酶譜MMP,免疫共沉淀,流式多因子檢測,CCK8代做

            產(chǎn)地類別 國產(chǎn) 價格區(qū)間 面議
            應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

            蛋白雙向2D-WB 電泳實驗服務(wù)

             

             

            實驗技術(shù)簡介

            2D-WB是雙向電泳與傳統(tǒng)western blot結(jié)合而成的一項技術(shù)。一般實驗流程 為抗原蛋白混合物先經(jīng)雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉(zhuǎn)印至支持膜上,再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術(shù)可以檢測到抗原等電點或分子量發(fā)生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應(yīng)用;2D-WB結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù),可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。

            2D Westerm blot概述

            2D-WB是雙向電泳與傳統(tǒng)western blot結(jié)合而成的一項技術(shù)。一般實驗流程 為抗原蛋白混合物先經(jīng)雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉(zhuǎn)印至支持膜上,再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術(shù)可以檢測到抗原等電點或分子量發(fā)生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應(yīng)用;2D-WB結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù),可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。

            2D Western blot技術(shù)服務(wù)內(nèi)容

            1、蛋白質(zhì)抽提與定量;

            2、雙向電泳;

            3、轉(zhuǎn)膜,封閉,孵育,顯示成像。

            實驗操作流程

            1、第--項電泳(IEF) ,膠條平衡,第二項電泳SDS-APGE.

            2、第二項電泳結(jié)束后,取出凝膠進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,轉(zhuǎn)膜方法可選擇濕法轉(zhuǎn)移和半干法轉(zhuǎn)移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

            3、封閉,5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(室溫)或過夜(4)。

            4抗孵育,根據(jù)抗體說明書選擇孵育時間,常規(guī)的孵育條件是室溫1小時或4度過夜,抗孵育后取出膜

            TBST洗滌3次,每次5分鐘。

            5、二抗孵育:根據(jù)一抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3,每次5分鐘。

            6、顯影:A、B底物按比例稀釋混臺均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進(jìn)行顯影,直到出現(xiàn)清晰的蛋白質(zhì)條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時間需綜臺考慮蛋白質(zhì)的上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時間等因素。

            7、定影后,清洗膠片,晾干,標(biāo)定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

            送樣須知,為了保證2D Western blot技術(shù)服務(wù)能順利進(jìn)行,樣品寄送需滿足以下要求:

            1、顧客提供:組織、細(xì)胞、蛋白質(zhì)溶液等; (可交由研謹(jǐn)公司代購)。

            2、運輸要求:干冰或液氮包裝寄送。

            :樣本應(yīng)避免各類污染和反復(fù)凍融。

            2D Western blot技術(shù)服務(wù)報告內(nèi)容

            1、蛋白質(zhì)定量結(jié)果及電泳上樣量;

            2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結(jié)果;

            3、2D Western blot完整的實驗報告,包括實驗步驟、使用儀器和試劑等。

            : 2D Western blot實驗步驟

            1、2D Western blot蛋白質(zhì)樣本制備,制備的主要原則是盡可能溶解全部蛋白質(zhì),破壞蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間的相互作用,避免各類干擾物質(zhì),樣品制備與IEF兼容等。

            2、雙向電泳的主要步驟,第-項電(IEF) ,膠條平衡,第二項電泳SDS-APGE.

            3、第二項電泳結(jié)束后,取出凝膠進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,轉(zhuǎn)膜方法可選擇濕法轉(zhuǎn)移和半干法轉(zhuǎn)移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

            4、封閉, 5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(室溫)或過夜(4)。

            5-抗孵育,根據(jù)抗體說明書選擇孵育時間,常規(guī)的孵育條件是室溫1小時或4度過夜,一 抗孵育后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

            6、二抗孵育:根據(jù)-抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人抗兔等), 室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

            7、顯影:AB底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進(jìn)行顯影,直到出現(xiàn)清晰的蛋白質(zhì)條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時間需綜合考慮蛋白質(zhì)的.上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時間等因素。

            8、定影后,清洗膠片,晾干,標(biāo)定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

             




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