果膠裂解酶（pectinate lyases，PL）試劑盒
| 參考價(jià) | ￥640.00-￥1100.00 |
- 公司名稱 優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司
- 品牌YLKBIO
- 型號(hào)
- 所在地上海
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間2024/6/29 16:19:22
- 訪問(wèn)次數(shù) 3006
| 100管/48樣 | 1100.00元 | 119 盒可售 |
| 50管/24樣 | 640.00元 | 96 盒可售 |
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| CAS | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 純度 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 分子式 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/48樣、50管/24樣 |
| 貨號(hào) | YLK-SH103 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研 | 測(cè)試方法： | 微量法、紫外分光光度法 |
果膠裂解酶（pectinate lyases，PL）試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100T/48S
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
果膠裂解酶（EC4.2.2.10）是果膠酶的重要組成部分，是一種能降解植物細(xì)胞壁，導(dǎo)致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶，來(lái)源比較廣泛，主要來(lái)源于微生物，可用于果汁、果酒的澄清，提高水果出汁率，植物病毒的純化，紙漿的漂白和紡織品的生物精煉，在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
測(cè)定原理：
果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵，生成在還原端C4和C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸，在235nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體6mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體6mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體6mL×1瓶，4℃保存。
酶液提?。?/span>
1．組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2．細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 培養(yǎng)液：直接測(cè)定。
測(cè)定操作表：
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至235nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 操作表
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
試劑一（μL） | 120 | |
試劑二（μL） | 120 | |
40℃溫育3min | ||
酶液（μL） | 20 | 20 |
混勻，40℃反應(yīng)30min | ||
試劑三（μL） | 60 | 60 |
混勻于微量石英比色皿/96孔板（UV板）測(cè)定235nm處吸光值A，△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管。 | ||
酶活性計(jì)算公式：
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1. 組織中PL活性
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PL活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 64.1×△A÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PL活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T
= 64.1×△A÷W
2. 細(xì)菌、真菌PL活性
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PL活性（nmol/min/104cell）= △A ÷（ε×d）×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 64.1×△A÷細(xì)胞數(shù)量
3. 培養(yǎng)液PL活性
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PL活性（nmol/min/mL）= △A÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T
= 64.1×△A
ε：不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù)：5200L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min
b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1. 組織中PL活性
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PL活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 128.2×△A÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PL活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T
= 128.2×△A÷W
2. 細(xì)菌、真菌PL活性
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的
酶量為一個(gè)酶活力單位。
PL活性（nmol/min/104cell）=△A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 128.2×△A÷細(xì)胞數(shù)量
3. 培養(yǎng)液PL活性
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PL活性（nmol/min//mL）= △A÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T
= 128.2×△A
ε：不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù)：5200L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min
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