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            產(chǎn)品展廳

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            發(fā)布詢價單

            化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>實驗室服務(wù)>實驗整體外包服務(wù)>CRO綜合服務(wù)> 抗體酵母展示技術(shù)服務(wù)

            抗體酵母展示技術(shù)服務(wù)

            具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

            聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!


            泰克生物科技(天津)有限公司致力于為客戶提供基于噬菌體展示和納米抗體研發(fā)平臺的定制服務(wù),泰克生物的研發(fā)團(tuán)隊在抗體發(fā)現(xiàn)、重組抗體開發(fā)和噬菌體文庫構(gòu)建和篩選方面擁有豐富的經(jīng)驗。我們的服務(wù)包括使用各種抗體庫技術(shù)(包括噬菌體展示、細(xì)菌展示和酵母展示)生產(chǎn)人、猴、兔、牛、羊、羊駝和駱駝單克隆抗體。此外,泰克生物擁有的抗體發(fā)現(xiàn)和噬菌體平臺可以提供:抗體偶聯(lián)藥物發(fā)現(xiàn)服務(wù)、CAR候選分子發(fā)現(xiàn)服務(wù)以及相關(guān)的抗體測序和親和力測定服務(wù);納米抗體文庫構(gòu)建與篩選服務(wù),噬菌體文庫構(gòu)建和篩選服務(wù)以及抗體親和力成熟等相關(guān)服務(wù)。

            泰克生物的科學(xué)家致力于為戰(zhàn)勝癌癥以及各種疾病提供生物學(xué)研究方法和服務(wù)。泰克生物的科學(xué)家認(rèn)為,建立以客戶服務(wù)為中心的運營模式對于優(yōu)化藥物開發(fā)流程,同時組建不同研究領(lǐng)域背景的團(tuán)隊進(jìn)行未來的藥物發(fā)現(xiàn)和癌癥研究具有重要意義。泰克生物的這一長期發(fā)展目標(biāo)激勵著我們?yōu)榭蛻籼峁﹥?yōu)質(zhì)的技術(shù)服務(wù)和研究成果。




            抗體偶聯(lián)藥物發(fā)現(xiàn)服務(wù)、CAR候選分子發(fā)現(xiàn)服務(wù)以及相關(guān)的抗體測序和親和力測定服務(wù);納米抗體文庫構(gòu)建與篩選服務(wù),噬菌體文庫構(gòu)建和篩選服務(wù)以及抗體親和力成熟等相關(guān)服務(wù)

            泰克生物著力于為客戶提供高質(zhì)量,且具性價比的抗體藥物前期發(fā)現(xiàn)技術(shù)服務(wù)。我們在藥物抗體發(fā)現(xiàn)方面擁有10年的項目開發(fā)經(jīng)驗和心得,積累了充足的抗體定制和重組蛋白生產(chǎn)經(jīng)驗?;诮湍阁w展示技術(shù)(Yeast Display Technology)平臺的服務(wù),泰克生物能夠為客戶提供一系列包括但不限于兔源、鼠源、羊源、駝源等不同物種的單克隆抗體制備服務(wù),及其配套的完整可追溯性文件體系。

            酵母抗體展示技術(shù)(Yeast Display Technology)是指用抗體序列可變區(qū)與凝集素Aga2p融合表達(dá),Aga2p蛋白亞基通過兩個二硫鍵與固定在酵母細(xì)胞壁上的Aga1p 蛋白亞基結(jié)合,結(jié)合流式分選技術(shù),將靶向抗原的特異性抗體給篩選出來。


            酵母展示抗體文庫構(gòu)建服務(wù)

            泰克生物可為客戶提供來自駝源VHH納米抗體庫,以及其他物種scFv形式抗體的酵母展示文庫構(gòu)建及篩選服務(wù)。VHH納米抗體庫,又稱為駝源重鏈抗體文庫,抗體分子量大小為15kDa,是駝源動物產(chǎn)生的一種抗體。酵母抗體文庫展示體系受限于自身物理特性限制,物理庫容滴度一般<107,因此主要應(yīng)用于客戶對項目庫容要求不高,動物免疫后PBMC細(xì)胞經(jīng)過二次分選以及避免漏掉二硫鍵形成的抗體發(fā)現(xiàn)項目。同時酵母展示文庫相對噬菌體展示文庫技術(shù)而言,前者在微量抗體表達(dá)后抗體活性層面相較于后者要高,得益此基礎(chǔ),在流式篩選時就能區(qū)分抗體的親和力高低。


            目前被廣泛應(yīng)用于CAR-T/CAR-NK治療性抗體,主要以駝源VHH抗體(又被稱為納米抗體)發(fā)現(xiàn)為主,VHH/scFv抗體酵母展示發(fā)現(xiàn)路徑如圖1所示:


            企業(yè)微信截圖_16697909976943.png


            圖1基于酵母技術(shù)平臺的VHH/scFv抗體發(fā)現(xiàn)服務(wù)


            抗體酵母展示技術(shù)服務(wù)內(nèi)容和周期


            步驟

            服務(wù)內(nèi)容

            QC標(biāo)準(zhǔn)

            周期

            Step1:蛋白表達(dá)

            (1) 密碼子優(yōu)化+基因模板合成+表達(dá)載體構(gòu)建;

            (2) 質(zhì)粒抽提+轉(zhuǎn)染(哺乳表達(dá)系統(tǒng))目的蛋白檢測(WB,SDS-PAGE);

            (3) 蛋白表達(dá)放大+蛋白親和純化;

            交付:表達(dá)載體,克隆甘油菌,重組蛋白3-3.5mg,純度>85%,標(biāo)準(zhǔn)實驗報告

            4-6周

            Step2:動物免疫

            (1) 動物免疫4次,加強免疫一針,共計免疫5針;

            (2) 免疫前采集陰性血清,第4針采血進(jìn)行ELISA檢測血清效價;

            (3) 若第4針血清抗體效價(蛋白抗原>105;多肽抗原>104)滿足要求,則采血前7天再次加強免疫1針,如不滿足要求,則繼續(xù)常規(guī)免疫;

            (4) 效價合格,采血分離單核細(xì)胞;

            動物:背景清晰(年齡,性別,防疫情況);

            免疫:蛋白抗原>105;多肽抗原>104

            采血:數(shù)量100ml以上;

            PBMC細(xì)胞:>105/vial

            8-10周

            Step3:模板cDNA制備

            (1) PBMC總RNA提?。≧NA提取試劑盒)

            (2) 高保真RT-PCR制備cDNA(反轉(zhuǎn)錄試劑盒)

            cDNA:反轉(zhuǎn)后>1ug/ul,膠圖分布均勻;

            cDNA模板總量>150ug;

            1 天

            Step4:抗體酵母展示文庫構(gòu)建

            (1) 以cDNA為模板,兩輪PCR擴增VHH基因

            酵母表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)化: VHH基因拼接酵母展示載體,電擊轉(zhuǎn)化酵母宿主菌,構(gòu)建抗體庫,電擊次數(shù)不低于10次

            鑒定:隨機挑選24個克隆,PCR鑒定陽性率+PCR鑒定多樣性+插入率

            文庫陽性率:>90%;

            文庫插入性率:>90%;

            庫容:>106

            1-2周

            Step5:文庫篩選(磁珠+Facs)

            (1) 磁珠分選;

            (2) FACS分選(免疫雙標(biāo)分選);

            (3) 鋪板+陽性克隆菌培養(yǎng)+抗體基因測序;(>20個,多達(dá)96個);

            陽性標(biāo)準(zhǔn):雙陽性菌株;

            VHH篩選標(biāo)準(zhǔn):CDR氨基酸序列不同

            2-3周

            Step6:抗體驗證(體外驗證)

            (1) 將獲得的抗體序列構(gòu)建合適的表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)+親和純化+抗體蛋白定量;

            (2) Elisa驗證抗體與抗原結(jié)合,進(jìn)行下游驗證(交付EC50數(shù)據(jù));

            (3) BLI法驗證抗體親和力;

            (4) 細(xì)胞功能驗證:流式驗證;

            (5) 驗證細(xì)胞系(抗原受體過表達(dá)細(xì)胞系);

            交付:表達(dá)載體,克隆菌株,表達(dá)菌株,重組抗體蛋白1mg,純度90%;

            快速親和力測定結(jié)果;

            4-6周



            █ 抗體酵母展示技術(shù)平臺抗體酵母展示技術(shù)平臺抗體酵母展示技術(shù)服務(wù)優(yōu)勢

            ?物種適應(yīng)性廣泛:人,鼠,兔,羊,羊駝,駱駝,魚等物種的單抗開發(fā)均兼容

            ?技術(shù)平臺成熟:提供的1級免疫文庫的建庫庫容為106-107;插入率均滿足>95%,篩選獲得的抗體親和力普遍處于nM- pM級別

            ?開發(fā)周期短:獲得PBMC后,建庫到篩選獲得抗體序列,3-4周

            ?產(chǎn)品交付標(biāo)準(zhǔn)高:針對免疫庫,交付免疫前后血清,抗體展示文庫,酵母表達(dá)菌株,抗體序列

            ?實驗記錄可追溯:QC質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)(含RNA提取,cDNA制備等),中英文實驗報告,手寫實驗記錄本

















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