Annexin V-Cy5 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海貝博生物科技有限公司
- 品牌 貝博生物
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/3/28 21:05:43
- 訪問次數(shù) 341
產(chǎn)品標(biāo)簽
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| 供貨周期 | 一周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
保存溫度
2-8℃避光
Annexin V-Cy5 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒注意事項(xiàng)
1.長期不用可以-20℃保存。
2.Annexin V-Cy5染色液避免反復(fù)凍融。多次凍融會導(dǎo)致失效。
3.Annexin V-Cy5染色液需要長期保存時(shí)可以根據(jù)使用情況進(jìn)行小量分裝后-20℃保存。
4.試劑拆封后請盡快使用完！
2.Annexin V-Cy5染色液避免反復(fù)凍融。多次凍融會導(dǎo)致失效。
3.Annexin V-Cy5染色液需要長期保存時(shí)可以根據(jù)使用情況進(jìn)行小量分裝后-20℃保存。
4.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
1年
1.檢測方法
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
3.熒光顯微鏡
適用樣本
1.懸浮細(xì)胞
2.貼壁細(xì)胞
2.貼壁細(xì)胞
產(chǎn)品特點(diǎn)
1.方便：可用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測；
2.快速：1小時(shí)內(nèi)即可完成實(shí)驗(yàn)；
3.準(zhǔn)確：能準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞，并計(jì)數(shù)各群細(xì)胞的比例。
2.快速：1小時(shí)內(nèi)即可完成實(shí)驗(yàn)；
3.準(zhǔn)確：能準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞，并計(jì)數(shù)各群細(xì)胞的比例。
產(chǎn)品應(yīng)用
1.流式細(xì)胞儀
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
儀器準(zhǔn)備
1.流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦
2.離心機(jī)
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.離心機(jī)
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.PBS 緩沖液（pH7.4，實(shí)驗(yàn)室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
4.鋁箔
2.吸頭
3.一次性手套
4.鋁箔
Annexin V-Cy5 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒使用注意事項(xiàng)
1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體損失導(dǎo)致試劑量不夠用。
2.細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。離心力在不損失細(xì)胞的前提下盡可能小，重懸細(xì)胞是動(dòng)作要輕柔，避免多次反復(fù)的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。
3.Annexin V-FITC（等）和Propidium iodide（等）是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請注意避光，盡量減少它們暴露在光下的時(shí)間。有必要時(shí)可以使用帶蓋子的冰盒或鋁箔紙避光。標(biāo)記后將細(xì)胞保持在避光環(huán)境中。移液過程中短暫暴露在光線下（<30秒）是可以接受的。
4.由于細(xì)胞凋亡是一個(gè)快速和動(dòng)態(tài)的過程，因此在染色后立即進(jìn)行分析。
5.使用Annexin V-FITC（等） 試劑盒檢測凋亡需要針對活細(xì)胞。不要固定細(xì)胞，固定操作會對結(jié)果產(chǎn)生干擾。
2.細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。離心力在不損失細(xì)胞的前提下盡可能小，重懸細(xì)胞是動(dòng)作要輕柔，避免多次反復(fù)的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。
3.Annexin V-FITC（等）和Propidium iodide（等）是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請注意避光，盡量減少它們暴露在光下的時(shí)間。有必要時(shí)可以使用帶蓋子的冰盒或鋁箔紙避光。標(biāo)記后將細(xì)胞保持在避光環(huán)境中。移液過程中短暫暴露在光線下（<30秒）是可以接受的。
4.由于細(xì)胞凋亡是一個(gè)快速和動(dòng)態(tài)的過程，因此在染色后立即進(jìn)行分析。
5.使用Annexin V-FITC（等） 試劑盒檢測凋亡需要針對活細(xì)胞。不要固定細(xì)胞，固定操作會對結(jié)果產(chǎn)生干擾。
使用方法
樣品染色：
1. 離心收集懸浮細(xì)胞。離心機(jī)300-500g力，2-8°C，離心時(shí)間5分鐘，棄培養(yǎng)基。（貼壁細(xì)胞用不含EDTA的消化后離心，收集細(xì)胞。消化時(shí)間不宜過長，以防損傷細(xì)胞膜，引起假陽性）。
2. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次。
3. 用400ul 1X Annexin V結(jié)合液懸浮細(xì)胞，濃度大約為1 X 106 cells/ml。
4. 在細(xì)胞懸浮液中加入5ul Annexin V- Cy5染色液，輕輕混勻后于2-8°C避光條件下孵育15分鐘。
5. 加入其它顏色的核酸染色液后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育5分鐘。
6. 立即用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測。
流式細(xì)胞儀分析：
上機(jī)檢測前，須用待測細(xì)胞制備三個(gè)質(zhì)控樣本來設(shè)定流式細(xì)胞儀的熒光補(bǔ)償和設(shè)置十字門的范圍：
① 空白管，沒有染色的細(xì)胞：不加Annexin V- Cy5。用于調(diào)節(jié)電壓。
② 單染管，Annexin V- Cy5單染細(xì)胞：用明顯凋亡的細(xì)胞，僅用Annexin V- Cy5染色細(xì)胞。用于調(diào)節(jié)補(bǔ)償。
③ 單染管，7-AAD/PI/其它單染細(xì)胞：僅用核酸染料染色細(xì)胞。用于調(diào)節(jié)補(bǔ)償。
④ 檢測管：待測的處理細(xì)胞，加Annexin V- Cy5，加核酸染料。用空白管和單染管調(diào)節(jié)好電壓補(bǔ)償后，獲得所需要的流式數(shù)據(jù)。
【注】：
具體流式設(shè)置按常規(guī)方法即可。請參照流式細(xì)胞儀說明書或咨詢儀器技術(shù)支持。
經(jīng)處理過的細(xì)胞此時(shí)可以在流式細(xì)胞儀上分析。
按照常規(guī)的流式凋亡檢測的操作即可。
Annexin V-Cy5的熒光激發(fā)波長652nm，發(fā)射波長670nm；
熒光顯微鏡/激光共聚焦觀察：
1. 滴加30-50ul用Annexin V-Cy5染色的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞。
注：對于貼壁細(xì)胞，可以象懸浮細(xì)胞那樣染色后， 滴一滴細(xì)胞懸液于載玻片上，用蓋玻片蓋上細(xì)胞，熒光顯微鏡下觀察。也可直接用蓋玻片培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。根據(jù)蓋玻片大小，置于24孔或12孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)，然后誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。細(xì)胞染色在細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)進(jìn)行。先用PBS沖洗兩次，加入400μl Annexin V結(jié)合液于孔中。再加入5μl Annexin V-Cy5染色液，混勻。避光室溫反應(yīng)10分鐘。
2. 在熒光顯微鏡下用雙色濾光片觀察。
1. 離心收集懸浮細(xì)胞。離心機(jī)300-500g力，2-8°C，離心時(shí)間5分鐘，棄培養(yǎng)基。（貼壁細(xì)胞用不含EDTA的消化后離心，收集細(xì)胞。消化時(shí)間不宜過長，以防損傷細(xì)胞膜，引起假陽性）。
2. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次。
3. 用400ul 1X Annexin V結(jié)合液懸浮細(xì)胞，濃度大約為1 X 106 cells/ml。
4. 在細(xì)胞懸浮液中加入5ul Annexin V- Cy5染色液，輕輕混勻后于2-8°C避光條件下孵育15分鐘。
5. 加入其它顏色的核酸染色液后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育5分鐘。
6. 立即用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測。
流式細(xì)胞儀分析：
上機(jī)檢測前，須用待測細(xì)胞制備三個(gè)質(zhì)控樣本來設(shè)定流式細(xì)胞儀的熒光補(bǔ)償和設(shè)置十字門的范圍：
① 空白管，沒有染色的細(xì)胞：不加Annexin V- Cy5。用于調(diào)節(jié)電壓。
② 單染管，Annexin V- Cy5單染細(xì)胞：用明顯凋亡的細(xì)胞，僅用Annexin V- Cy5染色細(xì)胞。用于調(diào)節(jié)補(bǔ)償。
③ 單染管，7-AAD/PI/其它單染細(xì)胞：僅用核酸染料染色細(xì)胞。用于調(diào)節(jié)補(bǔ)償。
④ 檢測管：待測的處理細(xì)胞，加Annexin V- Cy5，加核酸染料。用空白管和單染管調(diào)節(jié)好電壓補(bǔ)償后，獲得所需要的流式數(shù)據(jù)。
【注】：
具體流式設(shè)置按常規(guī)方法即可。請參照流式細(xì)胞儀說明書或咨詢儀器技術(shù)支持。
經(jīng)處理過的細(xì)胞此時(shí)可以在流式細(xì)胞儀上分析。
按照常規(guī)的流式凋亡檢測的操作即可。
Annexin V-Cy5的熒光激發(fā)波長652nm，發(fā)射波長670nm；
熒光顯微鏡/激光共聚焦觀察：
1. 滴加30-50ul用Annexin V-Cy5染色的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞。
注：對于貼壁細(xì)胞，可以象懸浮細(xì)胞那樣染色后， 滴一滴細(xì)胞懸液于載玻片上，用蓋玻片蓋上細(xì)胞，熒光顯微鏡下觀察。也可直接用蓋玻片培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。根據(jù)蓋玻片大小，置于24孔或12孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)，然后誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。細(xì)胞染色在細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)進(jìn)行。先用PBS沖洗兩次，加入400μl Annexin V結(jié)合液于孔中。再加入5μl Annexin V-Cy5染色液，混勻。避光室溫反應(yīng)10分鐘。
2. 在熒光顯微鏡下用雙色濾光片觀察。
Annexin V-Cy5染色陽性的細(xì)胞將在細(xì)胞膜表面呈現(xiàn)明亮的紅色。其它非滲透核酸染料在早期凋亡細(xì)胞不會被染色或顯示背景熒光，而壞死或晚期凋亡細(xì)胞則會顯示顏色，相應(yīng)顏色的胞核和環(huán)繞細(xì)胞的紅色胞膜。在晚期凋亡細(xì)胞中還可以觀察到胞膜皺縮和起泡。
常見問題分析
實(shí)驗(yàn)過程中Annexin V染不上色或陽性率偏低?？赡艿脑蛉缦拢?br/>1. 用于檢測的流式細(xì)胞儀/顯微鏡設(shè)置不當(dāng)。調(diào)整使用正確的儀器設(shè)置。
2. 確定實(shí)驗(yàn)中的誘導(dǎo)劑是否能產(chǎn)生凋亡?？赏ㄟ^設(shè)定確切凋亡誘導(dǎo)效果的陽性藥物對照來排除這一情況。
3. 細(xì)胞未啟動(dòng)凋亡。重新確定誘導(dǎo)后凋亡啟動(dòng)的時(shí)間點(diǎn)（時(shí)程實(shí)驗(yàn)）。
4. 細(xì)胞數(shù)量偏少。增加細(xì)胞數(shù)量。
5. 貼壁細(xì)胞消化不當(dāng)。Annexin V 跟PS 的結(jié)合需要Ca2+離子，結(jié)合液中含有Ca2+，EDTA 的消化會影響染色，建議使用無EDTA 的，或者消化后用PBS洗滌干凈。
實(shí)驗(yàn)過程中陽性率偏高?？赡艿脑蛉缦拢?br/>1. 用于檢測的流式細(xì)胞儀/顯微鏡設(shè)置不當(dāng)。調(diào)整使用正確的儀器設(shè)置。
2. 細(xì)胞本身活力太差。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)未經(jīng)誘導(dǎo)凋亡的對照細(xì)胞經(jīng)染色后AnnexinV+/PI+雙陽性的細(xì)胞比例過高，造成這種結(jié)果的原因可能是細(xì)胞本身活力太差。建議用臺盼藍(lán)染色計(jì)算細(xì)胞的活力，臺盼藍(lán)拒染的細(xì)胞應(yīng)大于95%。若活力偏低低，建議重新復(fù)蘇細(xì)胞，通常剛復(fù)蘇的細(xì)胞至少要傳代3 次以后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2. 確定實(shí)驗(yàn)中的誘導(dǎo)劑是否能產(chǎn)生凋亡?？赏ㄟ^設(shè)定確切凋亡誘導(dǎo)效果的陽性藥物對照來排除這一情況。
3. 細(xì)胞未啟動(dòng)凋亡。重新確定誘導(dǎo)后凋亡啟動(dòng)的時(shí)間點(diǎn)（時(shí)程實(shí)驗(yàn)）。
4. 細(xì)胞數(shù)量偏少。增加細(xì)胞數(shù)量。
5. 貼壁細(xì)胞消化不當(dāng)。Annexin V 跟PS 的結(jié)合需要Ca2+離子，結(jié)合液中含有Ca2+，EDTA 的消化會影響染色，建議使用無EDTA 的，或者消化后用PBS洗滌干凈。
實(shí)驗(yàn)過程中陽性率偏高?？赡艿脑蛉缦拢?br/>1. 用于檢測的流式細(xì)胞儀/顯微鏡設(shè)置不當(dāng)。調(diào)整使用正確的儀器設(shè)置。
2. 細(xì)胞本身活力太差。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)未經(jīng)誘導(dǎo)凋亡的對照細(xì)胞經(jīng)染色后AnnexinV+/PI+雙陽性的細(xì)胞比例過高，造成這種結(jié)果的原因可能是細(xì)胞本身活力太差。建議用臺盼藍(lán)染色計(jì)算細(xì)胞的活力，臺盼藍(lán)拒染的細(xì)胞應(yīng)大于95%。若活力偏低低，建議重新復(fù)蘇細(xì)胞，通常剛復(fù)蘇的細(xì)胞至少要傳代3 次以后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
參考文獻(xiàn)
1.Wei Bing, Hanjun Sun et al.
Programmed Bacteria Death Induced by Carbon Dots with Different Surface Charge
Small 2016 （IF=8.315）
2.Linchong Sun, Libing Song et al.
cMyc-mediated activation of serine biosynthesis pathway is critical for cancer progression under nutrient deprivation conditions
Cell Research 2015 （IF=14.812）
3. Jian Chen, Weijie Zhang et al.
Mn(II) mediated degradation of artemisinin based on Fe3O4@MnSiO3-FA nanospheres for cancer therapy in vivo
Nanoscale 2015 （IF=7.76）
4. Yuanxin Zhang, Zhiyao Hou et al.
DNA-Hybrid-Gated Photothermal Mesoporous Silica Nanoparticles for NIR-Responsive and Aptamer-Targeted Drug Delivery
ACS Appl. Mater. Interfaces 2015 （IF=7.145）
Programmed Bacteria Death Induced by Carbon Dots with Different Surface Charge
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2.Linchong Sun, Libing Song et al.
cMyc-mediated activation of serine biosynthesis pathway is critical for cancer progression under nutrient deprivation conditions
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Mn(II) mediated degradation of artemisinin based on Fe3O4@MnSiO3-FA nanospheres for cancer therapy in vivo
Nanoscale 2015 （IF=7.76）
4. Yuanxin Zhang, Zhiyao Hou et al.
DNA-Hybrid-Gated Photothermal Mesoporous Silica Nanoparticles for NIR-Responsive and Aptamer-Targeted Drug Delivery
ACS Appl. Mater. Interfaces 2015 （IF=7.145）
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