小鼠肌腱干細(xì)胞（原代）簡介：  

肌腱干細(xì)胞是一種來源于肌腱組織的間充質(zhì)干細(xì)胞，其具有多向分化潛能，并且在外源性前列腺素E2作用下異常分化。體外培養(yǎng)時該細(xì)胞群具有克隆形成能力、自我更新及多向分化潛能等干細(xì)胞的普遍特性。肌腱干細(xì)胞可以被誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞、軟骨樣細(xì)胞、骨細(xì)胞分化；在裸鼠模型中，肌腱干細(xì)胞還可以形成肌腱樣組織，軟骨樣組織以及腱-骨連接樣組織等。相比骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞而言，TSCs具有更好的克隆形成能力和增殖能力，軟骨相關(guān)基因和肌腱相關(guān)基因表達更高，具有更好的成骨、成脂和成軟骨能力，因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞。  

本公司生產(chǎn)的小鼠肌腱干細(xì)胞采用酶解法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105/T25方瓶，細(xì)胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。  

小鼠肌腱干細(xì)胞（原代）使用方法：    

1、您收到細(xì)胞后，請按照以下方法進行操作：  

取出T25方瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液（備注：先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞，保存種子后再嘗試自己培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡），最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。  

2、細(xì)胞傳代：  

1細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的90%面積時，棄T25方瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞3次；  

2添加0.25%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中37度培養(yǎng)箱放置3-5分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm/min，離心5min；  

3棄上清，沉淀細(xì)胞用10ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；  

4待細(xì)胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。  

3、細(xì)胞凍存：  

1細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的90%面積時，棄T25方瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞3次；  

2添加0.25%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中37度培養(yǎng)箱放置3-5分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm/min，離心5min；  

3用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；  

4先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃1h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲存）。  

4、細(xì)胞復(fù)蘇：  

1從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；  

2將凍存管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含5ml培養(yǎng)液無菌離心管中，1000rpm離心5min，然后加入5ml培養(yǎng)液混勻細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中，放置于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；  

3第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。