谷an酸(glutamic acid，Glu)含量測定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

谷an酸含量測定試劑盒 氨基酸

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

Glu 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，不僅是組成蛋白質(zhì)的 20 種氨基酸之一，而且通過轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來源之一。此外，Glu 還是味精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。

測定原理：

利用專用提取液提取，然后用顯色劑進行顯色，顯色后在 570nm 下進行測定。

組成：

試劑二臨用前加入 10ml 蒸餾水，充分混勻溶解，用不完的試劑仍 4℃保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 ml 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

谷an酸提取：

1、細菌或培養(yǎng)細胞樣品：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 1000 萬細菌或細胞加入 2ml 試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.2g 組織，加入

2ml 試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）或細胞培養(yǎng)液樣品：按照血清（漿）或細胞培養(yǎng)液體積（ml）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議取 0.2ml 血清（漿）或者細胞培養(yǎng)液加入 2ml 試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 570nm，蒸餾水調(diào)零。

2、在有蓋EP 管中加入下列試劑：

混勻，90℃水浴 20min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，于 570nm 波長處比色，△A=A 測定管

-A 對照管。對照管只要做一管。

谷an酸含量計算：

1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0074x- 0.5255；x 為谷an酸含量（µg/ml），y 為吸光值。

2、按照血清（漿）或者細胞培養(yǎng)液體積計算

谷an酸含量(μg/ml)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2）=1351×(△A+0.5255)

3、按照蛋白濃度計算

谷an酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr

4、按照樣本質(zhì)量計算

谷an酸含量(µg/g 鮮重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.2×(△A+0.5255) ÷W

5、按照細菌或細胞密度計算

谷an酸含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)

V1：加入反應體系中樣本體積，1ml；V2：加入提取液體積，2 ml；V3：加入血清（漿）或細胞培養(yǎng)液體積，0.2 ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；1000：細菌或細胞總數(shù)，1000 萬。

注意：

1、該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中谷an酸含量測定，檢測下限為 100µg/ml。

2、標準曲線線性范圍為：100µg/ml -600µg/ml。

3、ΔA 線性范圍為：0.01-2；若大于 2 則需要將上清液用試劑一稀釋至適當倍數(shù)后測定，計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。

谷an酸含量測定試劑盒 氨基酸