細(xì)胞凍存密度

用途與描述

1、無血清細(xì)胞凍存液用于免疫細(xì)胞及干細(xì)胞的存儲(chǔ)。
2、細(xì)胞保藏中心，無血清細(xì)胞凍存液用于細(xì)胞株的長期保存。
3、科研高校，無血清細(xì)胞凍存液用于細(xì)胞株凍存。
4、無血清細(xì)胞凍存液用于醫(yī)院樣本庫細(xì)胞樣本保存。

支持高密度凍存MSC細(xì)胞（1-2x10⁷ cells/mL），為常規(guī)血清凍存液的10倍。

無血清細(xì)胞凍存液，含多種保護(hù)劑成分，一些保護(hù)劑，易于穿透細(xì)胞,避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞，
同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞，但可以在冰晶形成之前，優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子，降低細(xì)胞外溶液的電解
質(zhì)濃度，減少陽離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量。

我公司無血清細(xì)胞凍存液，為多種保護(hù)劑組合，在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù)，大大提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率。

主要成分

無血清細(xì)胞凍存液的主要成分：氨基酸，維生素，無機(jī)鹽，白蛋白，冷凍保護(hù)劑。

使用方法

1、細(xì)胞凍存前準(zhǔn)備

a)要求凍存的細(xì)胞在對(duì)數(shù)生長期，且活率大于90%。
b)計(jì)算細(xì)胞密度，一般要求密度在1-3x10⁶ cells/mL，不同細(xì)胞系請參照附表。 

2、細(xì)胞凍存過程

a）將要凍存的細(xì)胞懸液，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)后離心，800轉(zhuǎn)，3min即可。
b）棄去上清，將4度保存的無血清凍存液緩慢加入離心后的細(xì)胞沉淀中，根據(jù)密度調(diào)整細(xì)胞凍存液用量。
c）反復(fù)吹吸混勻后，分裝于細(xì)胞凍存管中，每管500ul-1000ul（建議500ul/管）。
d）將分裝好的細(xì)胞凍存管，直接置于-80度冰箱過夜保存，次日投入液氮中保存即可。

特別提醒：

1.凍存過程中，第2步和第3步在冰袋附近操作時(shí)，低溫避免保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞造成損傷。
2.細(xì)胞凍存管一定要保證密封，否則在復(fù)蘇過程中有可能會(huì)炸裂。

3、細(xì)胞復(fù)蘇過程

a）提前開啟水浴鍋，溫度調(diào)節(jié)到37度。
b）將凍存的細(xì)胞冷凍管從液氮中取出，迅速置于水浴鍋中，盡量1min內(nèi)融化，時(shí)間越短對(duì)細(xì)胞影響越小。
c）將融化后的含細(xì)胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養(yǎng)基中充分混勻（如細(xì)胞冷凍保存液為500ul，則
加入到5ml新鮮培養(yǎng)基中，如細(xì)胞冷凍保存液位1ml，則加入10ml新鮮培養(yǎng)基中。）
d）混勻后立即離心，800轉(zhuǎn)，3min即可，離心結(jié)束后棄上清，加入預(yù)溫的新鮮培養(yǎng)液。
e）混勻后分瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（二氧化碳濃度根據(jù)培養(yǎng)基要求決定，通常為5%）

免疫細(xì)胞凍存時(shí)間與復(fù)蘇活率對(duì)照表

MSC細(xì)胞凍存時(shí)間與復(fù)蘇活率對(duì)照表

無血清細(xì)胞凍存液與含血清細(xì)胞凍存細(xì)胞復(fù)蘇對(duì)比

一種無血清細(xì)胞凍存液號(hào)：ZL201710484789.6