細(xì)胞殘留人 TGF-B1 ELISA  檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

貨號(hào)：HG-TG001

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）法，將人TGF-β1標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本加入預(yù)包被抗人TGF-β1抗體的酶標(biāo)板，然后加入稀釋后的生物i素標(biāo)記的人TGF-β1檢測(cè)抗體，最后加入Streptavidin-HRP，形成抗體+抗原+抗體-Biotin+SA-HRP復(fù)合物，洗板后加入TMB顯色液顯色。TMB在HRP酶的催化下由無(wú)色轉(zhuǎn)化成藍(lán)色并在終止液的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色。黃色的深淺與樣本中被檢測(cè)到的人TGF-β1的量呈正相關(guān)。

檢測(cè)范圍:156.25~10000pg/mL

靈敏度:33.32 pg/mL

規(guī)格：

96T

應(yīng)用：

適用于生物制品純化工藝過(guò)程的優(yōu)化、中間工藝過(guò)程的雜質(zhì)控制以及終產(chǎn)品的放行檢測(cè)。

試劑盒組成：

備 注:所有組分存儲(chǔ)溫度均為 2~8℃，有效期12個(gè)月。

需自行準(zhǔn)備的材料

◆酶標(biāo)儀

◆去離子水

◆恒溫培養(yǎng)箱

◆全新濾紙

◆微量移液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1.所有試劑以及待測(cè)樣本需要恢復(fù)室溫。所有試劑現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.1x洗液配制：濃縮洗液平衡至室溫，不要有結(jié)晶?；靹蚝蟾鶕?jù)用量，取適量用超純水按1：9的比例，將10x洗液稀釋10倍，最終得到1x洗液。

3.1x檢測(cè)抗體配制:混勻后根據(jù)用量，取適量用檢測(cè)緩沖液按 1:99 的比例，將 100x 檢測(cè)抗體稀釋 100 倍，最終得到

1x 檢測(cè)抗體。

4.標(biāo)準(zhǔn)品的配制:
取1支標(biāo)準(zhǔn)品凍干粉，按管壁標(biāo)識(shí)加入超純水進(jìn)行溶解得到濃度100ng/mL的人TGF-βB1。
取8支 1.5 mL 離心管，每支管子先加入 150 μL 檢測(cè)緩沖液，使用溶解后的 100ng/mL 標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行 1:1稀釋。每一步稀釋都需要充分混勻。檢測(cè)緩沖液作為空白濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0pg/mI)。

5.樣本預(yù)處理:取細(xì)胞培養(yǎng)上清、尿液、血清或血漿等樣本類(lèi)型 20 uL 至離心管，加入 20 uL 酸性緩沖液，混勻后室溫孵育 10 分鐘;再加入 20L 堿性緩沖液中和樣本并混勻;最后用檢測(cè)緩沖液稀釋活化后的樣本，樣本可參考以下稀釋倍數(shù)。代入標(biāo)曲計(jì)算的樣本濃度需乘以稀釋倍數(shù)。

6.樣本稀釋:

人血清需要用檢測(cè)緩沖液稀釋 20 倍(10uL 活化后樣本加 190uL 檢測(cè)緩沖液，最終稀釋倍數(shù)為 60 倍)。

細(xì)胞培養(yǎng)上清(人類(lèi)和非人類(lèi))需要根據(jù)樣本實(shí)際濃度進(jìn)行稀釋(如果不稀釋?zhuān)罱K稀釋倍數(shù)為3倍)。

人類(lèi)尿液樣本需要根據(jù)樣本實(shí)際濃度進(jìn)行稀釋(如果不稀釋?zhuān)罱K稀釋倍數(shù)為3倍)。

人血漿需要用檢測(cè)緩沖液稀釋8倍(25 L 活化后樣本加 175 uL 檢測(cè)緩沖液，最終稀釋倍數(shù)為 24 倍)。

小鼠、大鼠血清或血漿需要稀釋 50 倍(10 μL 活化后樣本加 490 uL 檢測(cè)緩沖液，最終稀釋倍數(shù)為 150 倍)。

操作步驟

使用前所有試劑組分以及待測(cè)樣本需要恢復(fù)室溫。建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品和待檢樣本進(jìn)行雙復(fù)孔測(cè)定。

1. 試劑準(zhǔn)備：提前準(zhǔn)備好各種待測(cè)試劑、稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本。
2. 酶標(biāo)板條確定：計(jì)算待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品所需酶標(biāo)板條，將酶標(biāo)條從鋁箔袋取出，剩余的酶標(biāo)條放回鋁箔袋中并封好袋口，低溫保存。
3. 每孔加入50μL檢測(cè)緩沖液。
4. 樣本及檢測(cè)抗體孵育：加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本，50 μL/孔，確保 15 min 內(nèi)完成點(diǎn)樣。再向每孔加入50 μL 1x檢測(cè)抗體。用封板膜封板，置于恒溫孵育器，500轉(zhuǎn)/分鐘、25℃孵育30分鐘。
5. 洗板：棄去孔中液體，加入 1×洗液（300 μL/孔）洗板4次，拍干酶標(biāo)板中殘留液體。

6. 酶結(jié)合物孵育：將酶結(jié)合物加入酶標(biāo)板中，100 μL/孔，用封板膜封板，置于恒溫孵育器，500轉(zhuǎn)/分鐘、25℃孵育30分鐘。
7. 洗板：同步驟5。
8. 顯色：每孔加入 100 μl 顯色底物 TMB，室溫孵育15~20 分鐘。
9. 終止：每孔加入 100 μL終止液，輕輕震動(dòng)酶標(biāo)板至顯色均勻。
10. 讀值：20 min 內(nèi)讀取 450nm/630nm 波長(zhǎng)處的吸光度值。450nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)，630nm 作為參比波長(zhǎng)。

結(jié)果處理

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)OD處理（見(jiàn)下例，僅為示例，具體以實(shí)際測(cè)定為準(zhǔn)）

2. 標(biāo)準(zhǔn)品理論濃度與對(duì)應(yīng) OD 值以四參數(shù)進(jìn)行擬合，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(如下圖所示)。

注意事項(xiàng)

1.樣品首i次檢測(cè)，建議進(jìn)行至少3個(gè)連續(xù)倍數(shù)的稀釋?zhuān)栽跇?biāo)曲范圍內(nèi)產(chǎn)生至少一個(gè)稀釋后樣品。

2.試劑按標(biāo)簽說(shuō)明儲(chǔ)存，使用前室溫平衡。

3.包被酶標(biāo)板使用前請(qǐng)平衡至室溫再打開(kāi)外包裝袋，實(shí)驗(yàn)中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個(gè)月。其他不用的試劑應(yīng)包裝好或蓋好。

4.實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

5.使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑。試劑的稀釋、加樣和終止反應(yīng)應(yīng)充分混勻或搖勻?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果尤為重要。

6.洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾放入反應(yīng)孔中吸水。

7.底物顯色液對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結(jié)果。

8.本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒，請(qǐng)?jiān)谛趦?nèi)使用。

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