BF6012 NADP 磷酸酶（NADPase）試劑盒 輔酶Ⅱ系列
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號(hào) BF6012
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/4/8 10:12:14
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | BF6012 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 與 NADK 一起調(diào)控NAD 和NADP 之間的平衡。 |
NADP 磷酸酶（NADPase）試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法 100 管/96 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
NADPase 主要存在于植物組織中，是生物體內(nèi)wei一催化 NADP+降解為NAD+的酶，與 NADK 一起調(diào)控NAD 和NADP 之間的平衡。
測(cè)定原理：
NADPase 能夠催化NADP+水解為NAD+和無(wú)機(jī)磷的反應(yīng)，通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量來(lái)測(cè)定NADPase 活性。
NADP 磷酸酶（NADPase）試劑盒 輔酶Ⅱ系列
組成：
產(chǎn)品名稱 | BF6012-100T/96S | Storage |
提取液： | 100ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 15ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1 瓶×4 | -20℃ |
試劑三：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑四：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑五：液體 | 25ml | RT |
試劑六：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 | 10ml | 4℃ |
說(shuō)明書(shū) | 一份 | |
試劑二：粉劑×4 支，-20℃保存；用時(shí)加入 1 ml 試劑一充分溶解備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。試劑三：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時(shí)加入 25ml 蒸餾水，溶解后 4℃可保存一周。 試劑四：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時(shí)加入 25ml 蒸餾水，溶解后 4℃可保存一周。 試劑六：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10ml×1 瓶，4℃保存。
0.5μmol/ml 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將試劑六 20 倍稀釋，即取 0.5ml 試劑六加 9.5 蒸餾水，充分混勻。
定磷試劑的配制：按 H2O: 試劑三:試劑四:試劑五=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷試劑應(yīng)為淺黃色，若無(wú)色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水
樣本的前處理：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 660nm，蒸餾水調(diào)零。
2、酶促反應(yīng)（在 EP 管中加入下列試劑）
試劑名稱（μl） | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
試劑一 | 120 | 120 |
試劑二 | 40 | 40 |
37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）預(yù)熱 5min
樣本 | 40 | |
蒸餾水 | 40 |
37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）準(zhǔn)確反應(yīng) 30min 后，95℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，10000g 25℃離心 5min，取上清
3、定磷（在EP 管或 96 孔板中加入下列試劑）
標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | |
0.5μmol/ml 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液 | 20 | |||
蒸餾水 | 20 | |||
上清液 | 20 | 20 | ||
定磷試劑 | 200 | 200 | 200 | 200 |
混勻，25℃室溫放置 30min，在 660nm 處，記錄各管吸光值。
注意事項(xiàng)：
1、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對(duì)測(cè)定所用試管要求嚴(yán)格，要沒(méi)有一點(diǎn)磷，若試管放過(guò)磷酸 或磷酸鹽緩沖液，一定要洗得非常干凈，要先用洗潔精加水煮，再用自來(lái)水沖，最后用蒸餾水沖干凈。最好用一次性塑料管或新玻璃管，避免磷污染是檢測(cè)成敗的關(guān)鍵。
2、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管和對(duì)照管只要做一次即可。
NADPase 酶活性計(jì)算：
1、按組織蛋白濃度計(jì)算：
定義：每小時(shí)每毫克組織蛋白NADPase 分解NADP 產(chǎn)生 1μmol 無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè) NADPase 活力單位。
NADPase (μmol/h/mg prot)=(C 標(biāo)準(zhǔn)管×V 總)×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷ (V 樣×Cpr)÷T=5×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷Cpr
2、按樣本鮮重計(jì)算：
定義：每小時(shí)每g 組織NADPase 分解NADP 產(chǎn)生 1μmol 無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè) NADPase 活力單位。
NADPase (μmol/h /g 鮮重)=(C 標(biāo)準(zhǔn)管×V 總)×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）×V 總÷(W× V 樣
÷V 樣總)÷T=5×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.5μmol/ml；V 總：酶促反應(yīng)總體積，0.2ml；V 樣：加入樣本體積，0.04ml ；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5 小時(shí)；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。
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