維生素 B1（Vitamin B1，VB1）試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/48 樣

維生素 B1試劑盒

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

維生素B1（Vitamin B1）是構(gòu)成脫羧輔酶的主要成分，參與細(xì)胞代謝中的三羧酸循環(huán)，是維持機(jī)體正常代謝必須的水溶xing維生素，在生物體能量代謝中有重要的作用。

測(cè)定原理：

VB1 在堿性條件下還原鐵氰hua鉀生成ya鐵氰hua鉀，亞鐵qing化鉀與 Fe³⁺在弱酸條件下生成普魯士藍(lán)，在 704nm 有特征吸收峰。

組成：

自備儀器和用品：

天平、研缽、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、1 ml 玻璃比色皿、蒸餾水。

樣本處理：

組織：將樣品磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 0.6ml提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸餾水 0.4ml，混勻后于 25℃，13000g 離心 10min，取上清測(cè)定（動(dòng)物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心 20-30 分鐘）。

細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 0.6ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；加蒸餾水 0.4ml，混勻后于 25℃，13000g 離心 10min，取上清測(cè)定。

血清：直接測(cè)定。

測(cè)定操作：

計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.017x+0.0031，R2 = 0.9991；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度：μg/ml；y 為△A（A 測(cè)定管-A 空白管）

按照蛋白含量計(jì)算

VB1 含量（μg/mg prot）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷Cpr

= 58.8×（△A-0.0031）÷ Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

VB1 含量（μg/g 鮮重）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（W÷V 樣總）

= 58.8×（△A-0.0031）÷ W

按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

VB1 含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）

= 58.8×（△A-0.0031）÷ 細(xì)胞數(shù)量

按照液體體積計(jì)算

VB1 含量（μg/ml）=（△A-0.0031）÷ 0.017

= 58.8×（△A-0.0031）

V 樣總：加入提取液體積，1ml； Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)：

若測(cè)定結(jié)果中吸光值超過(guò) 1，請(qǐng)將樣本稀釋后進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

蛋白濃度較高的樣品，比如動(dòng)物組織，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將樣本稀釋后再測(cè)定，在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

顯色完成后立即進(jìn)行測(cè)定。

標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為 0.1-10μg/ml。

維生素 B1試劑盒