上海美析儀器有限公司
細(xì)菌增殖曲線的測定實驗方案
檢測樣品：大腸桿菌
檢測項目：細(xì)菌增殖
方案概述：原理：將少量細(xì)菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養(yǎng)基中，在適宜的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，定時測定培養(yǎng)液中的菌量，以菌量的對數(shù)作縱坐標(biāo)，生長時間作橫坐標(biāo)，繪制的曲線叫生長曲線。它反映了單細(xì)胞微生物在一定環(huán)境條件下于液體培養(yǎng)時所表現(xiàn)出的群體生長規(guī)律。依據(jù)其生長速率的不同，一般可把生長曲線分為延緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。這四個時期的長短因菌種的遺傳性、接種量和培養(yǎng)條件的不同而有所改變。
實驗方法、操作步驟
1. 種子液制備
取大腸桿菌斜面菌種1支，無菌條件下，挑取1環(huán)菌苔，接入無菌牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液中，靜止培養(yǎng)18 h作種子液。
2. 接種培養(yǎng)
用無菌吸管準(zhǔn)確吸取2 mL種子液，加入裝有50 mL無菌牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的250 mL三角瓶中，并于37 ℃下振蕩培養(yǎng)（振蕩頻率250 r/min）。
3. 生長曲線測定
分別在0、1、2、3、6、9、12、15、18、21 h取下三角瓶，吸取1 ml培養(yǎng)液，用未接種的培養(yǎng)液為空白對照，將上述培養(yǎng)液于波長600 nm處比色(測定OD值前,將待測定的培養(yǎng)液振蕩,使細(xì)胞均勻分布)，但要求消光度在0.10一0.65之間，對濃度大的菌懸液用未接種的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測定，經(jīng)稀釋后測得的OD值要乘以稀釋倍數(shù)，才是培養(yǎng)液實際的OD值。
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