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            醫(yī)療

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            臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分離方法和注意事項(xiàng)

            檢測(cè)樣品:臍帶血

            檢測(cè)項(xiàng)目:血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離

            方案概述:臍帶血是指胎兒出生時(shí)臍帶內(nèi)及胎盤近胎兒一側(cè)血管內(nèi)的血液。臍帶血單個(gè)核細(xì)胞(CordBloodMononuclearCell,CBMC)分離自正常人胎盤臍帶組織,是臍帶血中具有單個(gè)核的細(xì)胞,包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等,是機(jī)體防御系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分。

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            更新時(shí)間2022年06月30日

            上傳企業(yè)匯智和源生物技術(shù)(蘇州)有限公司

            下載方案

            臍帶血是指胎兒出生時(shí)臍帶內(nèi)及胎盤近胎兒一側(cè)血管內(nèi)的血液。臍帶血單個(gè)核細(xì)胞(Cord Blood Mononuclear Cell,CBMC) 分離自正常人胎盤臍帶組織,是臍帶血中具有單個(gè)核的細(xì)胞,包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等,是機(jī)體防御系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分。


            1    原理


            單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與其它細(xì)胞不同,在沉降過程中不同比重的細(xì)胞會(huì)處于不同的分布位置。因此,可利用各種血細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞比重之間的差異將各種血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離開來。


            2    方法


            1)  取新鮮抗凝臍帶血,按照1:1比例加入RPMI 1640培養(yǎng)基,將血液進(jìn)行稀釋(以降低血液粘稠度),輕柔混勻,備用。


            2)  向無菌離心管內(nèi)加入適量的單個(gè)核細(xì)胞分離液,將稀釋后的臍帶血平鋪到分離液液面上方(分離液:稀釋臍帶血=1:2),保持兩液面界面清晰。


            3)  800g,室溫,離心 20min-30min(注:設(shè)置較慢的加速度和減速度,如果有十檔,設(shè)為第三檔)。


            4)  離心結(jié)束后,吸棄血漿層,小心吸取CBMC層(即白膜層)并轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。離心結(jié)束后,管內(nèi)液面從上至下依次為稀釋血漿層、CBMC層、分離液層和紅細(xì)胞層(見圖1)。

             

            圖1 稀釋臍帶血離心前后的分層狀態(tài)圖


            5)  向離心管中加入10mL 的RPMI 1640培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞,250g,室溫離心 10min ,棄上清。重復(fù)該步驟 1~2 次,即可用于后續(xù)試驗(yàn)。


            3    注意事項(xiàng)


            1)  血液新鮮程度是影響分離效果的關(guān)鍵因素,請(qǐng)盡量使用采集后24h內(nèi)的血液進(jìn)行CBMC分離。


            2)  為保證細(xì)胞的活力,整個(gè)操作過程請(qǐng)輕柔,避免對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械性的損傷。


            3)  為保持細(xì)胞狀態(tài)良好,請(qǐng)盡量縮短整個(gè)試驗(yàn)的周期。


            4    臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒


            IPHASE/匯智和源針對(duì)人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分離的特點(diǎn),開發(fā)了人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒。該試劑盒包含單個(gè)核細(xì)胞分離液和洗滌液兩個(gè)組分,各成分對(duì)細(xì)胞無毒性,不會(huì)影響細(xì)胞的原始狀態(tài);同時(shí),該試劑盒操作簡(jiǎn)單便捷,可大大縮短細(xì)胞分離時(shí)間,分離所得細(xì)胞純度高、狀態(tài)好、得率高。


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