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酶誘導是指細胞在底物影響下進行特定酶合成量增加的作用。藥物代謝主要發(fā)生在肝臟和腸道。其中肝臟代謝主要由位于肝細胞滑面內質網的細胞色素P450（Cytochrome P450，CYP）催化，少部分由非CYP酶（如UGT酶）催化代謝。據統(tǒng)計，臨床上超過90%的藥物由CYP450酶代謝。

PART.01    CYP450酶誘導機理及試驗方法

現(xiàn)已證明CYP450酶表達受孕烷X受體 (PXR)、組成型雄烷受體 (CAR)、芳烴受體（AHR）等核受體調控。這3個核受體均為轉錄因子，當與配體結合激活后，核受體會從細胞質轉入細胞核中。其中，PXR和AhR分別與細胞核內的視黃醛X受體（RXR）和轉運蛋白（ARNT）形成異源二聚體，進而結合在相應靶基因上（如CYP酶），調節(jié)CYP酶的表達。AhR參與CYP1A2的誘導；PXR主要參與CYP3A4的誘導，其次是2C亞家族；CAR與PXR的誘導譜非常重疊，此外有研究表明CAR還可以誘導CYP2B6。因此，在藥物早研期間，可只評估CYP1A2，CYP2B6 和 CYP3A4的誘導作用。

由于CYP酶誘導的試驗是從“轉錄”、“翻譯”、“蛋白質翻譯后修飾”直至成為活性CYP酶蛋白，所以CYP酶試驗系統(tǒng)必須是肝細胞而非其亞結構如肝微粒體或肝S9。隨后在CYP450酶誘導試驗時，通常需要結合酶活性和mRNA兩個水平上的結果做結論。當僅做酶活性試驗時，若藥物同時存在酶抑制現(xiàn)象時，可能會掩蓋誘導作用；而測量mRNA水平則能更真實地反應誘導源頭上的效應，且更為敏感，直觀地避免了酶活性檢測存在的問題。

鑒于此，為滿足客戶精準地了解其早研藥物的酶誘導作用，IPHASE技術人員成功研發(fā)人CYP450酶誘導表達檢測試劑盒（SYBR法）！

PART.02    IPHASE產品

IPHASE作為創(chuàng)新藥體外研究生物試劑，技術人員以SYBR染料法，采用ΔΔCT-定量PCR的方式檢測CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4這三個CYP酶基因經奧美拉唑、苯巴筆脫和利福平誘導后其mRNA水平的變化，發(fā)現(xiàn)其mRNA倍數(shù)變化均顯著增加，滿足藥物相互作用指導原則，說明IPHASE人CYP450酶誘導mRNA水平檢測試劑盒（SYBR法）能夠滿足客戶在mRNA水平上進行酶誘導實驗。

IPHASE人CYP450酶誘導mRNA水平檢測試劑盒（SYBR法）提供給客戶提供進行qPCR試驗的擴增試劑，CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4這三個CYP酶基因以及一個內參基因GAPDH的特異性引物。經驗證，IPHASE所提供的特異性引物擴增效率高，且熔解曲線無雜峰，滿足客戶的試驗需求。

圖1.CYP1A2引物擴增效率圖

注：R2=98.4%；Eff%=106.401%

（R2越接近100%擴增效率越好；Eff擴增效率越接近90%~110%越好，下同）

圖2.CYP2B6引物擴增效率圖

注：R2=98.5%；Eff%=95.791%

圖3.CYP2B6熔解曲線圖

圖4.CYP3A4熔解曲線圖

圖5.內參基因GADPH標準曲線圖

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經驗，推出了多領域、多種類的科研試劑，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學領域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學品等的遺傳毒性研究提供便捷產品，望廣大科研工作者咨詢。

發(fā)    文    章    得     獎    勵

凡使用本公司產品，在國內及國際刊物上發(fā)表論文（論文發(fā)表日起一年內），并注明產品屬于匯智和源/IPHASE所有，即可申請獎勵。根據發(fā)表刊物影響因子不同，給予不同金額獎品：

非SCI論文及IF≤5分，500元禮品；

5分＜IF≤8分 800元；

8分＜IF≤10分 1000元；

IF≥10分 2000元；

注：禮品卡也可兌換同等金額產品購買抵用券；

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關    于    我    們

匯智和源，致力于為創(chuàng)新藥研發(fā)企業(yè)及生命科學研究機構提供高品質的生物試劑，IPHASE為公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

• CYP450酶代謝表型研究試劑盒

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