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            科德角國際生物醫(yī)學(xué)科技(北京)有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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            細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測方法有哪些?

            時(shí)間:2022/7/21閱讀:1374
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            一、家兔檢測法

            1923Seibert提出用家兔檢測熱原方法,1942年美國藥典首先將家兔法作為藥品的熱原檢查,為保障藥品質(zhì)量和用藥安全發(fā)揮了重要作用。

             

            目前,對(duì)于熱原的概念國內(nèi)外仍未有*統(tǒng)一的認(rèn)識(shí)。但綜合國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道,普遍認(rèn)為熱原的本質(zhì)就是細(xì)菌內(nèi)毒素的脂多糖。WHO 文件中同樣提到,藥品中的熱原就是指細(xì)菌內(nèi)毒素,至少在藥檢范圍內(nèi)控制內(nèi)毒素就是控制熱原。嚴(yán)格地講,不是每一種熱原都具有脂多糖( lipoplysaccharide,LPS)的結(jié)構(gòu),在藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范條件下,藥品生產(chǎn)的質(zhì)量控制一般可以接受的觀點(diǎn)是:不存在細(xì)菌內(nèi)毒素意味著不存在熱原。多年來研究表明,熱原進(jìn)入人體血液循環(huán)系統(tǒng)后,并不直接引起發(fā)熱和其他毒性反應(yīng),但它可使細(xì)胞釋放內(nèi)源性熱原物質(zhì)。這種內(nèi)源性熱原可直接作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng),刺激體溫中樞,引起機(jī)體發(fā)熱。

             

            最早作為熱原檢測法的家兔檢測法也就成為人們檢測內(nèi)毒素的最早方法。此方法即將一定量的被檢標(biāo)本靜脈注入家兔體內(nèi),觀察其注射后的發(fā)熱情況,以決定所檢標(biāo)本中有無熱原存在。

             

            家兔檢測法為一種定性檢測內(nèi)毒素的方法,應(yīng)用歷史較久。但隨著社會(huì)的進(jìn)步、科技的發(fā)展,制藥工業(yè)飛速前進(jìn),新藥品種不斷增加,臨床用藥要求越來越高,家兔法局限性日益突出。如家兔對(duì)內(nèi)毒素在反應(yīng)上有個(gè)體差異,敏感度不高,不能定量檢測內(nèi)毒素等等,因此家兔檢測法現(xiàn)在已經(jīng)很少使用。

            二、GC/MS檢測方法

            氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用法是上個(gè)世紀(jì)出現(xiàn)的一種內(nèi)毒素檢測方法。此法主要依據(jù)細(xì)菌內(nèi)毒素的主要毒性部分類脂A水解時(shí)產(chǎn)生一種3-羥基脂肪酸的物質(zhì)。這種物質(zhì)是內(nèi)毒素所*的,并不存在于其他自然界的物質(zhì)當(dāng)中。每分子的類脂A含有4摩爾的3-羥基脂肪酸,類脂A的平均分子量為8000。通過對(duì)這種特異性3-羥基脂肪酸的檢測,可以定量檢測內(nèi)毒素的含量。由于儀器的限制,氣質(zhì)聯(lián)用的方法很難成為常規(guī)的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測方法。目前只應(yīng)用于科研,對(duì)空氣的質(zhì)量檢測等方面。

            三、試劑檢測方法

            我國藥典收載的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測方法為鱟試驗(yàn)法,包括2種方法,即凝膠法和光度測定法,后者又包括濁度法和顯色基質(zhì)法。當(dāng)各種檢測法得到的檢測結(jié)果不一致時(shí),以凝膠法的檢測結(jié)果為準(zhǔn)。

             

             

            鱟試驗(yàn)法有定性和定量之分,其按試驗(yàn)方法還可進(jìn)一步分為凝膠法、動(dòng)態(tài)濁度法、終點(diǎn)濁度法、動(dòng)態(tài)顯色法和終點(diǎn)顯色法。

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