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            氨基酸衍生法數(shù)據(jù)大PK:OPA or 茚三酮,原來選它

            時間:2022/6/15閱讀:1722
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            氨基酸是構(gòu)建生物機(jī)體的眾多生物活性大分子之一,是構(gòu)建細(xì)胞、修復(fù)組織的基礎(chǔ)材料。它被人體用于制造抗體蛋白、血紅蛋白、酶和激素以維持和調(diào)節(jié)新陳代謝,是一切生命之源。

             

            由于氨基酸的重要性,合適可靠的檢測方案將成為評估食品、飼料、藥物及生理樣品中氨基酸指標(biāo)的重要選擇。

             

            HPLC—柱后衍生法,50多年來作為氨基酸領(lǐng)域的重要檢測手段,因為其高效的測試準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性,深受廣大用戶的信賴。

            氨基酸檢測在藥物、食品、飼料中的主要應(yīng)用有

             

            ●   通過分析氨基酸組鑒定多膚和蛋白質(zhì);

            ●   原料藥和中間體中的雜質(zhì)和有關(guān)物質(zhì)的測定;

            ●   藥物中單個或總氨基酸的定量, 包括復(fù)雜基質(zhì)中標(biāo)記物的測定;

            ●   重組蛋白生產(chǎn)過程的控制;

            ●   確定氨基酸組成也是保證食品和飼料營養(yǎng)價值的必要條件;

            ●   用于產(chǎn)品質(zhì)量及過程監(jiān)測。

             


            衍生方法介紹


            Pickering Laboratories根據(jù)上述應(yīng)用的檢測對象的不同,將衍生方法分為OPA衍生法和茚三酮衍生法,兩種方法都可以與任何氨基酸陽離子交換柱和洗脫液組合使用。其中我們稱為Trione ®的茚三酮試劑,也廣泛應(yīng)用于氨基酸分析儀中。

             

            OPA法與茚三酮法區(qū)別見下表:


            氨基酸衍生法

             

            _

            Trione®劑分析法

            OPA劑分析法

            衍生試劑

             

            TlOO-預(yù)混試劑 ;自生產(chǎn)日期起計算, 4個月保質(zhì)期(950 ml/瓶)

             

            TlOOC -預(yù)混試劑;自生產(chǎn)日期起計算, 4個月保質(zhì)期(950 mL/瓶)

             

            T200 - 2部分試劑,混合后使用,從生產(chǎn)之日起12個月保質(zhì)期;4組/箱

            (900mL/瓶)

            OD104-氨基酸分析用OPA稀釋液;

             

            O120-OPA試劑(5g/瓶)

             

            3700-2000 -疏基化合物。(10g/瓶)

             

            這三種產(chǎn)品都是用于氨基酸OPA分析法

            適用樣品

             

            一級和二級氨基酸

            一級氨基酸

             

            在與OPA反應(yīng)之前需要檢測二級氨基酸氧化步驟。使用氧化步驟時,一級氨基酸的檢測靈敏度會有所降低。

            檢測器

            UV/VIS

            FLD

            儀器靈敏度

            10 pmole (在色譜柱上)

            2 pmole (在色譜柱上)

            色譜柱&洗脫液

            適用于任何陽離子交換柱氨基酸分析法

            與任何用于氨基酸分析的陽離子交換柱配合使用

            配置

            單泵Ony×PCXI vector PCX+ 0.5 m L反應(yīng)器

            單泵Ony×PCX/ vector PCX+ 0.15 ml反應(yīng)器。

             

            *需要帶有0.5 mL和0.1 mL反應(yīng)器的雙泵OnyxPCX來檢測二級氨基酸。 在此模式下, 初級氨基酸的靈敏度會降低。

             

             

            色譜柱的選擇


             

                                            圖1:鈉柱氨基酸分析選擇

             


             

                                         圖2:鋰柱氨基酸分析選擇

             


             

                                                圖3:氨基酸標(biāo)品

             

             


             

                                                     圖4:豆粕樣品

             

             


             

                                              圖5:水解單克隆樣品

             

             

             

            Pickering產(chǎn)品


             

             

             


            完整解決方案


            歐洲藥典8.0對于氨基酸的柱后衍生茚三酮法做了詳細(xì)的要求,藥典對于包括化學(xué)、 動物、 人或草藥來源的活性物質(zhì)、賦形劑和制劑,順勢療法制劑,抗生素,制劑和容器等都有所要求。

             

            Pickering Laboratories 將歐洲藥典作為測試依據(jù),為客戶提供完整的氨基酸分析解決方案。

             

                               Pickering 柱后衍生儀

             


            解決方案包括Onyx PCX/Vector PCX 柱后衍生儀器、分析柱、保護(hù)柱、緩沖液和Trione ®茚三酮試劑。并且對方法進(jìn)行了優(yōu)化, 在符合藥典各項體系適宜性要求的同時,提高了分析的靈敏度及分析效率。

             

             

                                           Pickering全套試劑包

             

             

             

                                     圖6:依據(jù)歐洲藥典8.0法測試氨基酸

             

             

             

            關(guān)于Pickering Laboratories

             

             


            美國Pickering Laboratories公司是僅有的專業(yè)提供人工測試體液和柱后衍生化學(xué)試劑、色譜柱、分析方法等柱后衍生分析整體解決方案的機(jī)構(gòu),其不斷創(chuàng)新及良好的信譽(yù)被眾多的美國政府機(jī)構(gòu)如EPA、ATF、FDA、AOAC和著名的廠商所認(rèn)可。

             

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