HIS

L-組氨酸（HIS）是一種氨基酸，參與人體的各種生物學(xué)機(jī)制。研究表明，由于其金屬螯合特性，HIS負(fù)責(zé)血紅蛋白和肌紅蛋白分子中鐵的結(jié)合，還負(fù)責(zé)清除活性氧和氮來源產(chǎn)生的自由基 。作為營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，它對(duì)治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和貧血很有價(jià)值，尤其是對(duì)慢性腎衰竭患者。人體生物體液中HIS的水平伴隨著營(yíng)養(yǎng)飲食以及各種疾病，如特應(yīng)性皮炎、組氨酸血癥、過敏等情況發(fā)生變化。

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現(xiàn)行的HIS檢測(cè)方法

現(xiàn)行的HIS檢測(cè)方法，除流行的反相液相色譜法，離子交換色譜很少使用，但對(duì)于分析具有可電離基團(tuán)的化合物，離子交換色譜是一種具有吸引力的分析技術(shù)。

與反相類似物相比，新型離子交換固定相的穩(wěn)定性具有優(yōu)勢(shì)。在 IEC中也可以使用有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相，從而拓寬了該技術(shù)在快速性和分離效率方面的應(yīng)用。

但是，IEC 的缺點(diǎn)包括平衡時(shí)間較長(zhǎng)、峰更寬和梯度洗脫受限。在柱后衍生化中，反應(yīng)以“孤立"的形式進(jìn)行，避免了內(nèi)源性化合物容易發(fā)生副反應(yīng)，從而影響分析方法的準(zhǔn)確性及穩(wěn)定性的問題。在分析未知基質(zhì)的復(fù)雜生物樣品時(shí)，沒有事先分離的在線衍生化總是容易受到干擾。

因此IEC與柱后衍生儀的結(jié)合已被證明是一種強(qiáng)大的分析工具，它融合了兩種技術(shù)的最佳特性，包括對(duì)各種分析物的高分離效率、色譜柱穩(wěn)定性、簡(jiǎn)單的樣品預(yù)處理、自動(dòng)化以及高靈敏度和選擇性。

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Pickering 柱后衍生方案

下述柱后衍生方案基于分析物與OPA在弱堿性介質(zhì)下的特異性在線反應(yīng)，無需親核試劑。通過使用經(jīng)典的基于非特異性OPA的伯胺化學(xué)方法對(duì)人體血清和尿液進(jìn)行代表性分析，證明了所提出的反應(yīng)在選擇性方面的特性。

圖1：設(shè)備連接圖示，柱溫箱及柱后衍生部分，可以與Pickering onyx PCX適配

圖2:Representative chromatograms from the analysis of human serum by (A) the proposed HPLC-PCD method and (B) using a non-speciffc PCD reaction (RA = 2 mmol L-1 OPA and RB = 5 mmol L-1 N-acetylcysteine in 100 mmol L-1 borate buffer (pH = 10), λex/λem = 340/460 nm).

圖3：Representative chromatograms from the analysis of human urine by (A) the proposed HPLC-PCD method and (B) using a non-speciffc PCD reaction (RA = 2 mmol L-1 OPA and RB = 5 mmol L-1 N-acetylcysteine in 100 mmol L-1 borate buffer (pH = 10),

圖4（左圖）:Accuracy of the proposed method. 

圖5（右圖）:Accuracy of the proposed method.

在此案例中鄰苯二甲酸酯（OPA）作為常用的 PCD 衍生化試劑之一，具有一定特性，例如在環(huán)境溫度下反應(yīng)動(dòng)力學(xué)快、試劑成本低、背景信號(hào)相對(duì)較低等。與氨基酸（包括組氨酸）的“經(jīng)典"OPA 反應(yīng)涉及伯氨基與 OPA 在堿性條件下（通常為 pH 10）在親核試劑存在下反應(yīng)，產(chǎn)生高熒光衍生物 。

然而，在常見的氨基酸中，在沒有親核試劑的情況下，HIS也通過不同的機(jī)制與OPA反應(yīng)。HIS -柱后衍生的方法有望成為開發(fā)高度特異性分析平臺(tái)的基礎(chǔ)，用于測(cè)定復(fù)雜生物材料中的 HIS及其他氨基酸。

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完整方案獲取

Pickering柱后衍生儀可適配HPLC、UPLC、IEC等色譜設(shè)備方法，與任何品牌的任何設(shè)備均可聯(lián)用，且可提供具有參考價(jià)值的應(yīng)用文獻(xiàn)，衍生試劑，色譜柱等一系列耗材作為輔助，加速方法開發(fā)進(jìn)程，且結(jié)果準(zhǔn)確可靠；

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 參考文獻(xiàn)：

Determination of histidine in human serum and urine by cation exchange chromatography coupled to selective on-line post column derivatization，Eirini Stampina a , Apostolia Tsiasioti a , Kalliopi Klimatsaki b , Constantinos K. Zacharis c , Paraskevas D. Tzanavaras a, Journal of Chromatography B，1173 (2021) 122697

Pickering

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