Postnova場流分離系統(tǒng)應用舉例——蛋白質聚集體分離的理想解決方案

時間：2010-11-1閱讀：847

Postnova場流分離系統(tǒng)應用舉例——蛋白質聚集體分離的理想解決方案

蛋白質聚集體已經(jīng)成為藥學發(fā)展和質檢上一個重要的問題。其活性，生物利用度和可能的消極免疫響應等性能直接與不同程度的聚集態(tài)的存在有關。因此不僅FDA, 更多的*和私人研究機構都對聚集態(tài)結構產(chǎn)生越來越大的興趣。他們研究的目標是確定的聚集情況，即藥物中的蛋白質中某個時間有多少聚集態(tài)結構形成以及如何避免這種情況。

場流分離技術是分離技術的一種，它可以與液相色譜（LC）相比。就像液相主要用來分離小分子一樣，場流分離主要用來分離大分子或粒子（可稱為：粒子色譜）。場流分離技術是一個*的分離技術，所有場流分離技術都使用相同的基本分離的原則，但采用不同的分離場。根據(jù)不同分離場，場流分離技術可分為流動場流分離，沉淀場流分離，熱場流分離等。

當樣品注射到場流分離通道時，分離應力作用于聚合物或粒子強迫它們向通道底層移動，通道底層就被稱為聚集壁。樣品不能透過聚集壁，所以它們再次擴散到通道中心。擴散應力被分離應力抵消，在很短的時間（一般是30～120秒）內兩種力之間就建立起一個穩(wěn)定的動態(tài)平衡。大小不同的顆粒有著不同的擴散系數(shù)，所以它們在通道內由于速度梯度而被分離。注射后的粒子/聚合物由于“垂直場力”的存在，受迫向垂直于流動相流動的方向移動。小粒子由于具有較大的擴散系數(shù)將會比大粒子在通道內擴散的更深遠。結果就是，小粒子在通道內被“層流”更快的定位，并因此而被洗脫出來；而大粒子則定位較慢，后洗脫出來。

上圖是使用AF4非對稱場流分離單克隆抗體的結果。在20分鐘內，不同程度的聚集態(tài)被分開，整個分離過程由于沒有固定相存在，因此蛋白質的空間結構不會被破壞。樣品不需要前處理，更可以通過聯(lián)用多種在線檢測器（LS, UV, RI, SEM, DLS），方便迅速得到需要的數(shù)據(jù)。

場流分離技術具有以下優(yōu)點：

• 快速、溫和的分離，可以兼容任何溶劑和緩沖液

• 超高的分辨率（±1nm）

• 沒有任何固定相的分離通道

• 寬分離范圍：粒徑1nm~100mm /分子量1000Da~10¹²Da

• 無需前處理及過濾，直接進樣復雜基質樣品

• 可收集所需要的樣品，方便升級至制備級

• 能夠連接各種檢測器，如在線串聯(lián)紫外、光散射、熒光、質譜等檢測器

• 可同時測定分子的分子量及粒子的粒徑。

這些優(yōu)點使場流分離技術在蛋白質及其聚集體分離方面可以發(fā)揮巨大的作用。

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