Chondrex Western blot封閉緩沖液(ChonBlock)
背景簡(jiǎn)介：
傳統(tǒng)的Western blot封閉緩沖液（如含BSA、酪蛋白及NGS的配方）提供了一種經(jīng)濟(jì)有效的方法來(lái)提升Western blot檢測(cè)的信噪比。盡管許多商品化封閉緩沖液成本較高，但其封閉效果優(yōu)于傳統(tǒng)配方。ChonBlock作為一種新型Western blot封閉緩沖液，其性能與其他商品化產(chǎn)品相當(dāng)，性價(jià)比高。
產(chǎn)品性能對(duì)比：
1.ChonBlock與競(jìng)品Western blot封閉緩沖液的性能對(duì)比
M:分子量Marker CB: ChonBlock封閉液 A:競(jìng)品A B：競(jìng)品B C.競(jìng)品C
1(條帶)：HMGB1 2(條帶)：降解的HMGB1
樣本：純化后的HMGB1細(xì)胞裂解液
一抗：HMGB1抗體（cat#7032）
二抗：goat anti-mouse IgG HRP (1:5000 dilution)
傳統(tǒng)BSA封閉液 | 競(jìng)品封閉液 | ChonBlock封閉液 | |
信號(hào) | 強(qiáng) | 弱 | 強(qiáng) |
背景干擾 | 顯著 | 無(wú) | 無(wú) |
特異性 | 低 | 高 | 高 |
2.ChonBlock與傳統(tǒng)Western blot封閉緩沖液的性能對(duì)比
L:SP2/O細(xì)胞裂解液 P:純化后的HMGB1(Cat#9050) M:分子量Marker
1(條帶)：HMGB1 2(條帶)：降解的HMGB1 BSA: 牛血清白蛋白 CRB:考馬斯亮藍(lán)
CB: ChonBlock封閉液 COMP:同競(jìng)品牌WB封閉液
采用15%聚丙烯酰胺凝膠在還原條件下進(jìn)行Western blot實(shí)驗(yàn)，以比較三種不同緩沖液體系的性能。實(shí)驗(yàn)使用小鼠抗HMGB1單克隆抗體（貨號(hào)#7032）作為一抗（工作濃度1μg/ml），并以HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體作為二抗（稀釋比例1:4000）。
結(jié)果顯示：
1)BSA-Tween緩沖液組因缺乏封閉效果，出現(xiàn)非特異性條帶拖尾現(xiàn)象；
2)競(jìng)品緩沖液雖能防止非特異性拖尾，但目標(biāo)信號(hào)較弱且背景顯色較深；
3)使用ChonBlock緩沖液的實(shí)驗(yàn)組則觀察到清晰的HMGB1特異性條帶，且背景信號(hào)極低。
ChonBlock封閉液 | 競(jìng)品A | 競(jìng)品B | 競(jìng)品C | |
信號(hào) | 高 | 中等 | 中等 | 低 |
背景干擾 | 低 | 低 | 無(wú) | 無(wú) |
3.ChonBlock與5% BSA-0.05% Tween 20對(duì)背景干擾的的封閉效果對(duì)比
Western blot中的背景噪音（BG noise）主要由抗體與硝酸纖維素膜的非特異性疏水結(jié)合引起。為評(píng)估ChonBlock與傳統(tǒng)封閉緩沖液（BSA-Tween）的性能差異，本研究將硝酸纖維素膜碎片分別用ChonBlock或BSA-Tween緩沖液封閉后置于ELISA板中，與一抗及二抗反應(yīng)，并通過(guò)TMB顯色（ELISA法）后用酶標(biāo)儀定量測(cè)定各孔OD值。如圖所示，背景噪音的OD值與抗體濃度呈正相關(guān)（圖a & b），且二者協(xié)同作用會(huì)進(jìn)一步放大信號(hào)干擾（圖c）。實(shí)驗(yàn)證明，ChonBlock封閉液對(duì)背景噪音的抑制效果優(yōu)于BSA封閉體系。
產(chǎn)品訂購(gòu)：
品牌 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
Chondrex | 9069P (PBS) | ChonBlock WB Buffer-1 for Blocking/Primary Antibody Dilution (x100 concentrate) | 10ml |
Chondrex | 9069T (TBS) | ChonBlock WB Buffer-1 for Blocking/Primary Antibody Dilution (x100 concentrate) | 10ml |
Chondrex | 90691P (PBS) | ChonBlock WB Buffer-2 for Goat Secondary Antibody Dilution (x100 concentrate) | 10ml |
Chondrex | 90691T (TBS) | ChonBlock WB Buffer-2 for Goat Secondary Antibody Dilution (x100 concentrate) | 10ml |
Chondrex | 90692P (PBS) | ChonBlock WB Buffer-2 for Rabbit Secondary Antibody Dilution (x100 concentrate), | 10ml |
Chondrex | 90692P (PBS) | ChonBlock WB Buffer-2 for Rabbit Secondary Antibody Dilution (x100 concentrate), | 10ml |
注：請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)體系選擇PBS或TBS配方的ChonBlock。
更多產(chǎn)品詳情，請(qǐng)垂詢Chondrex中國(guó)區(qū)總代理北京博蕾德生物科技有限公司。
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