如何選擇合適的凝膠填料

閱讀：4662發(fā)布時間：2016-6-21

做分離純化工作的人都知道，作為凝膠柱層析中的關鍵一環(huán)，選擇合適的填料是關重要的。今天小編為大家介紹一下幾點以供參考：

1.當目標蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚時，可用PAGE電泳方法或?qū)游龇椒右詼y定。分離范圍廣闊的Superose HR預裝柱很適合測定未知蛋白的分子量。用少量離子交換介質(zhì)在多個含不同PH緩沖液的試管中，可簡易地測出PI，并選擇純化用緩沖液的佳PH。

2.若對目標蛋白的特性或樣品成分不太了解，可嘗試幾種不同的純化方法：

(1)使用通用的凝膠過濾方法，選擇分離范圍廣闊的介質(zhì)如Superose、Sephacryl HR依據(jù)分子量將樣品分成不同組份。

(2)用含專一配體或抗體的親和層析介質(zhì)結(jié)合目標蛋白。亦可用各種活化偶聯(lián)介質(zhì)偶聯(lián)目標蛋白的底物、受體等自制親和介質(zhì)，再用以結(jié)合目標蛋白。一步即可得到高純度樣品。

(3)體積大的樣品，往往使用離子交換層析加以濃縮及粗純化。高鹽洗脫的樣品，可再用疏水層析純化。疏水層析利用高鹽吸附、低鹽洗脫的原理，洗脫樣品又可直接上離子交換等吸附性層析。兩種方法常被交替使用于純化流程中。

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