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凝膠成像系統(tǒng)中的光源因素
閱讀：3082 發(fā)布時間：2017-4-14
凝膠成像系統(tǒng)概念：
它是以一套可對凝膠進行成像的光學(xué)系統(tǒng)，而光源便是其光路系統(tǒng)的重要組成部分，可以說沒了光源，成像系統(tǒng)幾乎無法運行使用，但與CCD、鏡頭以及分析軟件相比，往往卻沒有得到應(yīng)有的重視。我們經(jīng)常遇到這樣的用戶，他們知道系統(tǒng)光源出現(xiàn)故障或整個系統(tǒng)報廢的時候都不知道凝膠成像透射紫外中有305nm與365nm兩種紫外燈管，或者搞不清他們之間有何區(qū)別。這其中固然有銷售商售后的不到位，但也反映出我們對凝膠成像系統(tǒng)光源的不重視和缺乏足夠的了解，希望這篇文章能夠幫您理清他們的區(qū)別和各自的作用。
凝膠成像系統(tǒng)類別：
根據(jù)應(yīng)用的不同，往往不同型號凝膠成像產(chǎn)品配有差異性的光源，大致類型可分為白光光源、紫外光源和高強度三色LED燈，其中白光和紫外光源又分別有透射和反射之分。
1、 不銹鋼材質(zhì)DE-500暗箱機身；
2、 CCD所在位置；
3、 鏡頭所在位置；
4、 機身光源控制面板，可控制濾光輪位置和激發(fā)光源開關(guān)；
5、 雙側(cè)反射白光光源；
6、 雙側(cè)雙波長（254nm、365nm）反射紫外光源；
7、 高度可調(diào)的抽拉式托盤，供化學(xué)發(fā)光使用；
8、 透射白光板，可折疊；
9、 雙波長（302nm、365nm）紫外透射光源。
在Fluorchem Q多色熒光成行系統(tǒng)中，雙側(cè)還安裝了三色LED燈光源。
首先是雙側(cè)反射白光光源，也是我們使用zui多的光源，通常作為系統(tǒng)照明光源使用，即放置或調(diào)整DNA膠或蛋白膠位置，或在對鏡頭調(diào)整聚焦時使用，當(dāng)然在對非透明材質(zhì)的蛋白膠或其他成像物質(zhì)進行成像時也需開啟反射白光。
其次透射白光，即通常所說白光板，主要用于蛋白質(zhì)膠拍攝時使用，因為白光板位于透射紫外燈箱上方，所以為不影響透射紫外光源的使用，同時也更節(jié)約室內(nèi)空間，白光板一般可以折疊豎立在箱體后部。
透射紫外光源，即紫外透射燈箱，主要用于DNA膠拍攝，由于DNA常用的熒光染料是EB（即Ethidium bromide，溴化乙錠），而用標(biāo)準(zhǔn)302nm 紫外光透射儀激發(fā)并放射出橙紅色信號，可用帶CCD成像頭的凝膠成像系統(tǒng)拍攝到，所以透射紫外的波長通常是305nm段。
紫外反射燈源，一般為選配件，主要原因是其使用并不廣泛，只是在非透明材質(zhì)的DNA跑膠載體如紙層析等的成像才需要使用。往往比較常用的還是透明的瓊脂糖凝膠與聚丙烯酰胺凝膠，透射光源*可以滿足，所以大部分廠家都只將紫外反射光源作為選配，只是在儀器上預(yù)留了位置與接口。還要指出的是抽拉式托盤的使用，由于化學(xué)發(fā)光成像無需任何光源，屬自發(fā)光成像，但由于化學(xué)發(fā)光的信號比較微弱，不穩(wěn)定，同時化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)的鏡頭往往是手動聚焦，所以需要一個高度可調(diào)的托盤專門供化學(xué)發(fā)光成像使用。此外，上文提到的三色LED燈光源是3個高光強反射激發(fā)器（475納米,、534納米、632納米），為多色熒光成像系統(tǒng)的比不可少的組成部分。Fluorchem HD2 的DE-500暗箱還預(yù)留連續(xù)波長光源光纖接口，以便于將來擴展至連續(xù)波長光源（激發(fā)光的波長范圍400-750nm），涵蓋了一些需要特殊激發(fā)光的熒光，多應(yīng)用于多色熒光（Cy3/Cy5）和活體成像。