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? 1 非洲豬瘟簡介
非洲豬瘟（英文名稱：African Swine fever，簡稱：ASF）是由非洲豬瘟病毒（英文名稱：African Swine fever virus，簡稱：ASFV）感染家豬和各種野豬（如非洲野豬、歐洲野豬等）引起一種急性、出血性、烈性傳染病。非洲豬瘟病毒是非洲豬瘟科非洲豬瘟病毒屬的重要成員，病毒有些特性類似虹彩病毒科和痘病毒科。病毒粒子的直徑為175－215納米，呈20面體對稱，有囊膜。基因組為雙股線狀DNA，大小170－190kb。在豬體內(nèi)，非洲豬瘟病毒可在幾種類型的細(xì)胞漿中，尤其是網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞中復(fù)制。該病毒可在鈍緣蜱中增殖，并使其成為主要的傳播媒介。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報告動物疫病，該病也是我國重點防范的一類動物疫情。
? 2 非洲豬瘟在我國的發(fā)病情況
自2018年8月3日我國確診非洲豬瘟疫情以來，我國已經(jīng)在遼寧、安徽、黑龍江、海南等地接連爆發(fā)非洲豬瘟疫情。盡管非洲豬瘟傳入我國僅幾年的時間，但已經(jīng)在多地接連爆發(fā)，造成了巨大的經(jīng)濟損失，而且非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似，只能依靠實驗室監(jiān)測確診。在目前的情況下，急需一種能對非洲豬瘟進(jìn)行快速檢測的方案！
? 3 非洲豬瘟病毒(ASFV)實時等溫擴增儀配置清單
項目 | 序號 | 物品名稱 | 型號規(guī)格 | 單位 | 數(shù)量 | 備注 |
主 機 箱 | 1. | 儀器主機 | HW-ZW16 | 臺 | 1 | |
2. | 儀器使用說明書 | 個 | 1 | |||
3. | 合格證/保修卡 | 本 | 2 | |||
4. | 儀器電源線 | 根 | 1 | |||
5. | 鋁合金箱 | 個 | 1 | |||
配 件 箱 | 6. | 電子天平 | 0-500g | 臺 | 1 | |
7. | 樣品杯 | 50mL | 個 | 24 | ||
8. | 移液槍 | 1-5ml | 把 | 1 | ||
9. | 移液槍槍頭 | 1-5ml | 包 | 1 | ||
10. | 移液槍 | 100μL-1000μL | 把 | 1 | ||
11. | 移液槍槍頭 | 100μL-1000μL | 包 | 1 | ||
12. | 移液槍 | 10μL-100μL | 把 | 1 | ||
13. | 移液槍槍頭 | 10μL-100μL | 包 | 1 | ||
14. | 移液槍 | 2μL-20μL | 把 | 1 | ||
15. | 移液槍槍頭 | 2μL-20μL | 包 | 1 | ||
16. | 剪刀 | 把 | 1 | |||
17. | 鑷子 | 把 | 1 | |||
18. | 研缽 | 直徑8cm | 個 | 1 | ||
19. | 離心機 | 大龍D1008 | 臺 | 1 | ||
20. | 離心管 | 1.5mL | 個 | 50 | ||
21. | PCR管 | 0.2mL | 個 | 50 | ||
22. | 非洲豬瘟病毒熒光等溫擴增檢測試劑 | 48T/盒 | 盒 | 5 | ||
重 要 配 件 | 23. | 漩渦混勻器 | 臺 | 1 | ||
24. | 畜牧恒溫箱 | -10℃~65℃ | 臺 | 1 | ||
25. | 高速冷凍離心機 | LC-LX-HR165A | 臺 | 1 | ||
26. | 研磨儀 | 臺 | 1 | |||
27. | 移液器（5種型號） | 支 | 10 | |||
28. | 冰箱 | 臺 | 1 |
? 4 非洲豬瘟病毒(ASFV)實時等溫擴增儀技術(shù)參數(shù)
儀器型號 | HW-ZW16 |
樣品通量 | 16x0.2ml，兼容單管和8聯(lián)管 |
加熱方式 | 半導(dǎo)體制冷片結(jié)合電性電阻熱紅外技術(shù) |
溫控范圍 | 室溫～85℃ |
溫控精度 | ±0.1℃ |
溫度均一性 | ±0.15℃ |
激發(fā)光波長 | 第一通道：470nm±10nm |
檢測光波長 | 第一通道：520nm±10nm |
激發(fā)光 | 高亮度LED |
檢測器 | 新型光學(xué)檢測器，結(jié)合數(shù)字電路控制，光信號穩(wěn)定 |
熒光傳導(dǎo)方式 | 太空專用光纖傳導(dǎo) |
結(jié)果判讀方式 | 根據(jù)擴增曲線軟件自動判讀陰陽性 |
結(jié)果顯示 | 可在機器顯示擴增曲線及出峰時間 |
檢測時間 | ≤40分鐘 |
檢測試劑 | 開放式恒溫?zé)晒鈾z測試劑 |
操作軟件 | 自帶軟件 |
控制方式 | 觸屏控制 |
檢測項目 | 可同時最多檢測16個項目 |
檢測靈敏度 | 10～109拷貝/反應(yīng)，且樣品間無交叉污染 |
儀器分析功能 | 根據(jù)所檢測樣品，直接分析判定陽性或陰性；也可通過標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行絕對定量 |
軟件設(shè)置功能 | 可選擇反應(yīng)程序；可對反應(yīng)程序進(jìn)行設(shè)置，如可設(shè)置反應(yīng)時間、可在反應(yīng)過程中修改反應(yīng)時間（縮短或延長）、可設(shè)置不同溫度，每個溫度檔位差為0.1℃；可將反應(yīng)程序保存為模板；可對不同孔進(jìn)行重命名；可設(shè)置掃描間隔時間，范圍為 18～60S，默認(rèn)間隔為 60S；可設(shè)置陰陽性判斷閾值；閾值線可上下拉動等 |
工作環(huán)境溫度 | 18～35℃ |
儲存溫度 | -20℃～55℃ |
環(huán)境相對濕度 | ≤85% |
工作電壓 | 100～240V，50～60Hz |
? 5 非洲豬瘟病毒熒光等溫擴增檢測試劑盒技術(shù)參數(shù)
作用與用途：用于血液、血球粉、淋巴結(jié)、脾臟、扁桃體以及豬肉產(chǎn)品中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。
1.規(guī)格：48次/盒；
2.保存條件：-20℃保存；
3.組成：熒光等溫擴增免提取反應(yīng)液：1100ul；Bst DNA聚合酶：75ul；陰性對照：1000ul；陽性對照：200ul；礦物油：1000ul；說明書：1份；
4.有效期：12個月；
5.本試劑盒適用于便攜式熒光定量PCR儀檢測箱及各種其他型號熒光定量PCR儀；
6.反應(yīng)體系：25ul；反應(yīng)時間：1h；報告基團：FAM；淬滅基團：None；
7.結(jié)果判定：有明確判定標(biāo)準(zhǔn)，被檢樣品熒光信號有指數(shù)型增長，陽性對照Tt值≤45并出現(xiàn)典型的擴增曲線，陰性對照無Tt值并且無擴增曲線即S型擴增曲線，結(jié)果成立；被檢樣品Tt值≤45并出現(xiàn)典型的擴增曲線為陽性；被檢樣品無Tt值并且無典型擴增曲線為陰性；被檢樣品Tt值在45-60之間并出現(xiàn)典型的擴增曲線為可疑。對于可疑結(jié)果應(yīng)重新檢測，如果樣品FAM通道仍有典型S型擴增曲線且Tt值≤60，則判定為陽性，否則為陰性；
8.本試劑盒經(jīng)中國動物疫病預(yù)防控制中心評價，診斷敏感性100%，特異性100%；
9.該產(chǎn)品為疫控（診）【2019】74號文件中推薦的產(chǎn)品；
10. 產(chǎn)品生產(chǎn)廠家具有分子生物學(xué)類診斷制品GMP車間。
