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二抗是在其他宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，上面通常連有酶或熒光素等標(biāo)記物。二抗針對(duì)某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每一個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記，大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用。

檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同時(shí)在后繼實(shí)驗(yàn)中也會(huì)有不同的檢測(cè)方案，如ELISA、WB、IHC、IF、IP、Flo等，因此在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測(cè)方案的要求，一般來(lái)說(shuō)，選擇合適的二抗需要從下面幾個(gè)方面考慮：

21. 一抗的種屬來(lái)源：

二抗應(yīng)根據(jù)一抗的物種來(lái)源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗，例如：如果一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗。

21. 一抗的類別與亞型：

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配，通常是針對(duì)單克隆抗體而言。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類，那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合，在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下，可以選用抗相應(yīng)物種IgG,或者你也可以選擇專門針對(duì)這一亞類的二抗。

21. 二抗的種屬來(lái)源：

二抗的種屬來(lái)源與其質(zhì)量沒(méi)有必然的聯(lián)系，不同來(lái)源的二抗在一般的實(shí)驗(yàn)里沒(méi)有太多的差別。然而在一些特殊的實(shí)驗(yàn)里，如雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)里，如果兩個(gè)一抗一個(gè)山羊來(lái)源，一個(gè)小鼠來(lái)源，則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗，這時(shí)候，二抗就不能選擇山羊或者小鼠來(lái)源的。

21. 二抗的耦聯(lián)標(biāo)記：

耦聯(lián)到二抗上的標(biāo)記主要有酶（辣根過(guò)氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），熒光基團(tuán)（FITC、PE、Dylight等），生物素，金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。對(duì)于WesternBlot和ELISA，常用的二抗是酶標(biāo)二抗；而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞免疫化學(xué)、組織免疫化學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)）中常用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗；免疫組化中也可以使用HRP或AP標(biāo)記的二抗。

21. 二抗的純度：

親和層析純化相對(duì)于傳統(tǒng)血清的純化、鹽沉淀等方法更加高效，得到的抗體純度較高，產(chǎn)生的非特異性背景少，所以親和層析純化的抗體一般更受人們歡迎。

21. 血清吸附處理：

經(jīng)過(guò)血清吸附過(guò)的二抗排除了與相關(guān)物種組織可能發(fā)生非特異性反應(yīng)的免疫球蛋白，因此將二抗與樣本的非特異性結(jié)合降低到更低。如經(jīng)過(guò)人血清吸附過(guò)的二抗，在檢測(cè)過(guò)程中就不會(huì)與樣本中人的免疫球蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。

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