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            上海聯(lián)碩生物科技有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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            抗體稀釋液和ELISA相關(guān)溶液的配制

            時(shí)間:2010/2/21閱讀:4380
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            抗體稀釋液和ELISA相關(guān)溶液的配制

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            1、抗體或免疫球蛋白稀釋液0.01mol/L pH7.2PBS
              

             NaH2PO4·2H2O

            0.39

            Na2HPO4

            1.27

            NaCl

            0.85

            NaN3

            200mg

            H2O(蒸餾水)

            至    1000ml

            2、ELISA洗液及HRP標(biāo)記抗體稀釋液PH7.4,PBST 

            NaCl

            2.0

            KH2PO4

            0.2

            Na2HPO4·12H2O

            2.9

            KCl

            0.2

            NaN3

            0.2

            H2O

            至    1000ml

            吐溫(Tween20

            0.5ml

              4°C保存?zhèn)溆?/font>

            3、包被液(簡(jiǎn)稱CBpH9.6  

            Na2CO3

            1.59

            NaHCO3

            2.93

            NaN3

            0.2

            H2O

            至    1000ml

              密封蓋好,4°C存放備用

            4、ELISA底物液(可溶性底物)
              

            磷酸-檸檬酸緩沖液pH5.0

             

            0.1mol/L檸檬酸(21.014/100ml)

            24.3ml

            0.2mol/L Na2 HPO428.4/1000ml)

            25.7ml

            H2O

            50ml

              4°C存放備用

            5DAB底物液(不溶性底物,組化病理等)
              

            0.05mol/L pH7.6  Tris-HCL

             

            Tris

            6.05

            HCL(36%)

            3.15克(約2.7mlHCL

            H2O

            至                            1000ml

            DAB3´,3´二氧基聯(lián)苯胺,不溶性底物,呈棕紅色

            6、DAB溶液配制:(組化及Western blot 顯色)
             DAB30mg,用0.05mol/L pH7.6Trs-HCL緩沖液100ml溶解,如有沉淀,過濾后使用,一般新鮮配制使用。用前加入1%H2O2 1-1.5ml,H2O2濃度為0.01%,混均后使用。 73´,3´,5´5´,-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)溶液配制:
             用二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)或無水乙醇,將TMB配成1%濃度,4°C保存半年以內(nèi)使用。使用前,用pH5.0磷酸-檸檬酸底物液9.9ml加入0.1ml(1mg/TMB)1%TMB液,再按每毫升TMB加入30%H2O2 1ul,混勻后立即使用。2N H2SO4終止后,450nm測(cè)定OD值。 

            8、1%離子瓊脂膠配制液
                作免疫雙相擴(kuò)散,單相擴(kuò)散及免疫電泳中使用。
               0.05UpH8.6巴比妥鈉-HCL緩沖液  

            巴比妥鈉

            23.8

            1mol/L HCL

            34.5ml

            H2O

            2150ml


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