人P選擇素（P-selectin）elisa試劑盒

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        人人P 選擇素選擇素（P-Selectin/CD62P）酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析

        人人 選擇素選擇素                                   酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析

                         試劑盒使用說(shuō)明書(shū)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

                         試劑盒使用說(shuō)明書(shū)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供研究使用本試劑盒僅供研究使用

本試劑盒僅供研究使用本試劑盒僅供研究使用

產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品編號(hào)：：CSB-E04708h

產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品編號(hào)：：

檢測(cè)范圍檢測(cè)范圍：：2.5 ng/ml - 160 ng/ml

檢測(cè)范圍檢測(cè)范圍：：

zui低檢測(cè)限zui低檢測(cè)限：：0.62 ng/ml

zui低檢測(cè)限zui低檢測(cè)限：：

特異性特異性：：本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的人P-Selectin/CD62P，且與其

特異性特異性：：

他相關(guān)蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。

有效期有效期：：6 個(gè)月

有效期有效期：：

預(yù)期應(yīng)用預(yù)期應(yīng)用：：ELISA          法定量測(cè)定人血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中

預(yù)期應(yīng)用預(yù)期應(yīng)用：：

P-Selectin/CD62P 含量。

說(shuō)明說(shuō)明

說(shuō)明說(shuō)明

1.  試劑盒保存：未開(kāi)封的試劑盒應(yīng)儲(chǔ)存于2-8℃；開(kāi)封后的酶標(biāo)板應(yīng)與干燥

    劑一起儲(chǔ)存于鋁箔袋中置于2-8℃保存。僅在此出儲(chǔ)存條件下，產(chǎn)品在有

    效期內(nèi)可正常使用。

2.  濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。

3.  中、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

4.  剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)

    驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。

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實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理

實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理

     用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗P-Selectin/CD62P

抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗 P-Selectin/CD62P  抗

體、HRP 標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB 顯色。TMB 在過(guò)氧化

物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺

和樣品中的P-Selectin/CD62P 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸

光度 （OD 值），計(jì)算樣品濃度。

試劑盒組成及試劑配制試劑盒組成及試劑配制

試劑盒組成及試劑配制試劑盒組成及試劑配制

1.  酶聯(lián)板酶聯(lián)板（Assay plate ）：                                      一塊（96 孔）。

    酶聯(lián)板酶聯(lián)板

2.  標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：                                          2 瓶（凍干品）。

    標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品

3.  樣品稀釋液樣品稀釋液（Sample Diluent）：                                  1×20ml/瓶。

    樣品稀釋液樣品稀釋液

4.  生物素標(biāo)記抗體稀釋液生物素標(biāo)記抗體稀釋液（（Biotin-antibody Diluent）：）             1×10ml/瓶。

    生物素標(biāo)記抗體稀釋液生物素標(biāo)記抗體稀釋液（（                            ））

5.  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液（（HRP-avidin Diluent）） 1×10ml/瓶。

    辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液（（                         ））

6.  生物素標(biāo)記抗體生物素標(biāo)記抗體（（Biotin-antibody）：）                 1×120μl/瓶（1：100）。

    生物素標(biāo)記抗體生物素標(biāo)記抗體（（                  ））

7.  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（（HRP-avidin）：）            1×120μl/瓶（1：100）。

    辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（（                ））

8.  底物溶液底物溶液（（TMB Substrate）：）                                   1×10ml/瓶。

    底物溶液底物溶液（（                 ））

9.  濃洗滌液濃洗滌液（（Wash Buffer ）） 1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25 倍。

    濃洗滌液濃洗滌液（（               ））

10. 終止液終止液（（Stop Solution）：）                                     1×10ml/瓶。

    終止液終止液（（                ））

需要而未提供的試劑和器材需要而未提供的試劑和器材

需要而未提供的試劑和器材需要而未提供的試劑和器材

1.  標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2.  高速離心機(jī)

3.  電熱恒溫培養(yǎng)箱

4.  干凈的試管和Eppendof 管

5.  系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器

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6.  蒸餾水，容量瓶等

標(biāo)本的采集及保存標(biāo)本的采集及保存

標(biāo)本的采集及保存標(biāo)本的采集及保存

1.  血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2 小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g 離心20 分鐘，

    取上清即可立即檢測(cè)；或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但

    應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣品應(yīng)再次離心，然后檢測(cè)。

2.  血漿：可用EDTA 或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30 分鐘內(nèi)于2   -   8°C

    1000 g 離心15 分鐘，取上清即可立即檢測(cè)；或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于

    -20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣品應(yīng)再次離心，然后

    檢測(cè)。

3.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g 離心20 分鐘，取上清即可立即

    檢測(cè)；或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    解凍后的樣品應(yīng)再次離心，然后檢測(cè)。

注：注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。。

注注：：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。。

標(biāo)本的稀釋原則標(biāo)本的稀釋原則：：

標(biāo)本的稀釋原則標(biāo)本的稀釋原則：：

首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。

只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過(guò)程中，應(yīng)

做好詳細(xì)的記錄。zui后計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：：2 瓶，使用前于6000-10000rpm 離心30 秒。每

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：：

瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10 分鐘以上，然后反復(fù)顛倒

/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為160 ng/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋160 ng/ml,

80 ng/ml, 40 ng/ml, 20 ng/ml, 10 ng/ml, 5 ng/ml, 2.5 ng/ml，樣品稀釋液直接

作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0   ng/ml，臨用前15 分鐘內(nèi)配制，用完丟棄，下次檢測(cè)使用新

鮮配置的標(biāo)準(zhǔn)品。

如配制80 ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml  （不要少于0.5ml）160 ng/ml 的上述標(biāo)準(zhǔn)

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品加入含0.5ml 樣品稀釋液的Eppendorf 管中，混勻即可，其余濃度以此類

推。

生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則：：

生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則：：

打開(kāi)瓶蓋前請(qǐng)離心，收集瓶壁上的溶液。臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀

釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制 （每孔100μl），實(shí)際

配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl 生物素標(biāo)記抗體加990μl 生物素標(biāo)記抗體

稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。

辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：：

辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：：

打開(kāi)瓶蓋前請(qǐng)離心，收集瓶壁上的溶液。臨用前以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和

素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔

100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素

加990μl 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用

前一小時(shí)內(nèi)配制。

操作步驟操作步驟

操作步驟操作步驟

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻

時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品

稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。加樣時(shí)，槍頭應(yīng)直接對(duì)

準(zhǔn)液面，切勿沿孔壁加樣。

1.  血清，血漿樣本用樣本稀釋液進(jìn)行1:30倍稀釋后進(jìn)行檢測(cè)，具體操作如下：

    取10μl  樣本加入到290μl          的樣本稀釋液（1:30稀釋）中混勻，得到的即

    為1:30倍稀釋后的樣本。

2.  加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，

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    余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于

    酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，

    37℃反應(yīng)120 分鐘。

    為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

3.  棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl （取1μl

    生物素標(biāo)記抗體加99μl 生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，

    在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60 分鐘。

4.  溫育60 分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3 次，每次浸泡1-2 分鐘，

    200μl/每孔，甩干。

5.  每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液 （同生物素標(biāo)記抗體工作液）

    100μl，37℃，60 分鐘。

6.  溫育60 分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5 次，每次浸泡1-2 分鐘，

    200μl/每孔，甩干。

7.  依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色 （（30 分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)

                                               （（

    準(zhǔn)品的前3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4 孔顯色不明顯，即可終止）。

8.  依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加

    入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底

    物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

9.  用酶聯(lián)儀在450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度 （OD 值）。 在加終止液

    后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)備注實(shí)驗(yàn)備注

實(shí)驗(yàn)備注實(shí)驗(yàn)備注

1.  用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到

    管底。

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2.  每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶

    液及終止液。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD 值至零。

3.  為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上

    蓋或覆膜。

4.  未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體

    工作液、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)

    勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液、或辣根過(guò)氧化物

    酶標(biāo)記親和素工作液。

5.  建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

洗板方法洗板方法

洗板方法洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上

鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml

注入孔內(nèi)，浸泡1-2 分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。

 自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。

計(jì)算計(jì)算

計(jì)算計(jì)算

請(qǐng)從我們的下載專業(yè)軟件"Curve Exert 1.3"，并根據(jù)提示制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），OD 值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對(duì)

數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；

再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方

程式，將樣品的OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即

為樣品的實(shí)際濃度。

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注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)

1.  本操作說(shuō)明適用于本操作說(shuō)明適用于48T 試劑盒試劑盒，， 48T 試劑盒中酶聯(lián)板試劑盒中酶聯(lián)板、標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品、生物素、生物素

    本操作說(shuō)明適用于本操作說(shuō)明適用于        試劑盒試劑盒，，      試劑盒中酶聯(lián)板試劑盒中酶聯(lián)板、、標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品、、生物素生物素

    標(biāo)記抗體及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素減半標(biāo)記抗體及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素減半。。

    標(biāo)記抗體及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素減半標(biāo)記抗體及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素減半。。

2.  當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。

3.  洗滌過(guò)程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。

4.  一次加樣時(shí)間控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

5.  請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。

6.  如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋

    倍數(shù)。

7.  在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí)，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。

8.  底物請(qǐng)避光保存。

9.  不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

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