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            高靈敏度的ELISA(HS-ELISA)或酶聯(lián)免疫熒光測量法(ELFIA)

            時間:2009/8/7閱讀:365
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            高靈敏度的ELISA(HS-ELISA或酶聯(lián)免疫熒光測量法(ELFIA)

             

                Shalev等用堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的抗體作用于具有潛在熒光的底物4-甲基傘形酮磷酸鹽,反應(yīng)后生成高強(qiáng)度的熒光物質(zhì)——4-甲基傘形酮,可用熒光儀測量。

             

                AP的傳統(tǒng)顯色底物(P-NP)比較,新底物使ELISA的檢測極限提高了1639倍,zui小檢出值可達(dá)10-15molL,即渺克(ag=10-18g)水平。除AP外,目前用于熒光測定的標(biāo)記酶還有β,半乳糖苷酶(β-G)HRP。三種酶及其相應(yīng)底物和應(yīng)用效果見表。

             

                ELISA應(yīng)用的酶和熒光底物表


                          產(chǎn)     激發(fā)光(nm)     發(fā)射光(nm)      相應(yīng)的信號


                AP      MUP       MU         360            450              10

               β-G     MUG       MU         360            450              10

                HRP     HPA     二聚體       317            414             0.03


                注:MUP(4-甲基傘形酮磷酸鹽)MU(4-Ep基傘形酮)  MUG(4-1~基傘形酮…p…D—半乳糖苷A(羥基丙酸

               

                Kitamura等將ELFIA法進(jìn)一步改進(jìn),用于定量測定人IL-2,采用雙抗體夾心法,并結(jié)合使用生物素化抗體和p—半乳糖苷酶標(biāo)記鏈霉親合素,以MUG為底物,敏感性比常規(guī)ELISA法提高約100倍,可測出IL-2的zui低水平為03pRmL

             

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