類固醇激素標(biāo)志物酶聯(lián)免疫測定的標(biāo)準(zhǔn)化

    類固醇激素測定中的問題主要是密切相關(guān)的交叉反應(yīng)物及血漿中結(jié)合蛋白的存在，尿液測定則新陳代謝產(chǎn)物是主要問題。zui初，大多數(shù)類固醇激素是用以’H作標(biāo)記物及用有機(jī)溶劑提取類固醇的放免方法測定，通常采用層析方法去除可能存在的交叉反應(yīng)類固醇。

    為校正預(yù)處理中的損失，提取前在樣本中加入微量‘H標(biāo)記的類固醇以估計提取回收率。這種方法通常非常準(zhǔn)確，但由于操作步驟較多，精密度易受影響。目前，由于更為特異的抗血清和從結(jié)合蛋白中釋放類固醇激素的封閉物質(zhì)的發(fā)展，大多數(shù)類固醇激素測定方法已改為直接測定。

    雖然這些方法減少了干擾，但并沒有*排除，因此，結(jié)合蛋白仍與分析物及競爭性標(biāo)記物相互作用。為解決這些問題，可將純的類固醇加入至已經(jīng)炭吸附去除內(nèi)源性類固醇的血清基質(zhì)中制備標(biāo)準(zhǔn)晶，炭吸附處理也會去除可能會產(chǎn)生交叉反應(yīng)或非特異干擾測定的小分子物質(zhì)，因此，這樣制備的標(biāo)準(zhǔn)品與臨床樣本并不一致，實際上，這意味著標(biāo)準(zhǔn)品的定值與類固醇的實際含量不一致。

    在自動化免疫測定中，標(biāo)記物通常為分子量較大的酶或熒光素，而不是放免中的小分子放射性核素，酶或熒光素標(biāo)記的抗原反應(yīng)速率與樣本中的抗原是不一樣的，溫育時間短，則難于達(dá)到結(jié)合反應(yīng)的平衡。因此，雖然直接的非放射性核素測定操作簡單、測定精密度好，但準(zhǔn)確度常容易出現(xiàn)問題。

    可的松（cortis01）在血清和尿液中常以相對較高的濃度存在，雖然這可以使測定較為容易，但不同的試驗得到的結(jié)果差異很大。一般來說血清可的松的測定較實際為高，zui可能的原因是血清中可的松結(jié)合蛋白的干擾所致。試劑廠家使用各種封閉試劑將可的松從可的松結(jié)合球蛋白（CBG）中分離出來，但究竟使用的是什么封閉試劑及是否*排除了結(jié)合蛋白的影響，廠家通常沒有明確告知。尿液中含有大量的類固醇代謝物和干擾可的松測定的耦合物，因此，大多數(shù)試驗要求在測定前必須將可的松提取出來，即使如此，也不能保證測定的準(zhǔn)確度是可以接受的。有比較研究表明尿可的松免疫測定的值較實際值高2倍。

    雌二醇（oestradi01）的測定在臨床上有不同的目的，從而所要求測定方法的特性也有所不同。用于排卵誘導(dǎo)的監(jiān)測則要求一個約為0．1～15nmol／L大的濃度測定范圍，而且由于測定結(jié)果用來指導(dǎo)治療時間是以天為基礎(chǔ)的，因此，要求測定時間快速。故而雌二醇的測定幾乎都用直接測定方法，普遍使用自動化分析儀。雌二醇測定在評價女孩子的青春期發(fā)育和絕經(jīng)期婦女的卵巢功能中也很重要。在青春前期的女孩子中雌二醇水平低于大多數(shù)測定方法的測定下限，即20～30pmol／L，絕經(jīng)期婦女雌二醇水平則低于100～llOpmol／L。某些直接測定方法宣稱其測定下限可達(dá)上述測定范圍，但這需用臨床樣本證實。

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