ELISA法檢測(cè)白細(xì)胞介素-6

    IL-6是單核巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等受IL-1刺激而產(chǎn)生的細(xì)胞因子，某些活化的T細(xì)胞亦能產(chǎn)生。IL-6的主要生物學(xué)活性有：促使活化的B細(xì)胞分化，刺激T細(xì)胞、胸腺細(xì)胞和骨髓造血干細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生某些急性期蛋白（如血漿纖維蛋白原）。

    [檢測(cè)方法]  ELISA法

    [方法學(xué)原理]  在微孔反應(yīng)板上包被抗人IL-6單克隆抗體，待測(cè)標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的IL-6會(huì)與抗人IL-6結(jié)合，游離的成分被洗去，同時(shí)加入生物素化的抗人IL-6抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。生物素與親和素特異結(jié)合，抗人IL-6抗體與結(jié)合在單克隆抗體上的人IL-6結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色劑，若反應(yīng)孔中有IL-6，HRP會(huì)使五色的顯色劑呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液變黃色。在波長(zhǎng)450nm處測(cè)吸光度，IL-6濃度與吸光度成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的IL-6濃度。

    [標(biāo)本準(zhǔn)備]  靜脈采血2ml，不抗凝。

    [試劑]

    1．預(yù)包被微孔反應(yīng)板

    2．濃縮酶結(jié)合物

    3．酶結(jié)合物稀釋液

    4.標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本稀釋液

    5．濃縮生物素化抗體

    6．IL-6標(biāo)準(zhǔn)品

    7．濃縮洗滌液

    8．顯色劑A、B

    9．終止液

    [儀器]  酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。

    [檢測(cè)步驟]

    1．在微孔反應(yīng)板相應(yīng)孔中分別加入待測(cè)樣本、不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul，再加生物素化抗體工作液50rd。

    2．振蕩混勻，置20～25℃環(huán)境中溫育120min。

    3．將孔內(nèi)液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。

    4．除空白孔外，加入酶結(jié)合物工作液100ul。

    5．振蕩混勻，置20-25℃環(huán)境中溫育30min。

    6．將孔內(nèi)液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。

    7．每孔加入顯色劑A、B各50fA，輕輕振蕩混勻，37C環(huán)境中避光顯色10min。

    8．加入終止液50t~l后，輕輕振蕩混勻。用酶標(biāo)儀（450nm波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照，求出IL-6水平。

    [正常參考值]  各實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)檢測(cè)方法的不同確立正常參考值。

    [注意事項(xiàng)]

   1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30rain后方可使用，未用完的微孔條用自封袋密封保存。

    2．酶標(biāo)板洗滌時(shí)各孔均需加滿洗滌液，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。應(yīng)設(shè)定30-60s的洗滌浸泡時(shí)間。

    3．滴加試劑前應(yīng)將滴瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體混勻。滴加時(shí)瓶身應(yīng)保持垂直，以使滴量準(zhǔn)確（注意：勿將試劑滴在孔壁上）。

    4．所有樣品和廢棄物都應(yīng)按傳染源處理。終止液為2mol／L硫酸，使用時(shí)應(yīng)注意安全。

    5．每批樣本應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    6．檢測(cè)劑工作液按說明書臨用前配置。

    7．若標(biāo)本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定范圍以外，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)。

    [臨床意義]  某些病毒性疾病中，如重癥肝炎、慢性病毒性肝炎時(shí)，患者血清IL-6水平升高，與ALT的升高基本保持一致。在其他急性細(xì)菌性、病毒性感染中血清IL-6水平未見明顯改變。

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