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基因測(cè)序儀的技術(shù)原理
閱讀：818 發(fā)布時(shí)間：2023-10-29
基因測(cè)序技術(shù)也稱作dna測(cè)序技術(shù)，即獲得目的dna片段堿基排列順序的技術(shù)，獲得目的dna片段的序列是進(jìn)一步進(jìn)行分子生物學(xué)研究和基因改造的基礎(chǔ)。
基因測(cè)序儀(即DNA測(cè)序儀)，是一臺(tái)能自動(dòng)灌膠、自動(dòng)進(jìn)樣、自動(dòng)數(shù)據(jù)收集分析等全自動(dòng)電腦控制的測(cè)定基因片段的高檔精密儀器。
技術(shù)原理：
在分子生物學(xué)研究中，基因的序列分析是進(jìn)一步研究和改造目的基因的基礎(chǔ)。用于測(cè)序的技術(shù)主要有Sanger等。發(fā)明的雙脫氧鏈末端終止法。Sanger法是根據(jù)核苷酸在某一固定的點(diǎn)開始，隨機(jī)在某一個(gè)特定的堿基處終止，產(chǎn)生A，T，C，G四組不同長(zhǎng)度的一系列核苷酸，然后在尿素變性的PAGE膠上電泳進(jìn)行檢測(cè)，從而獲得DNA序列。Sanger測(cè)序法得到了廣泛的應(yīng)用。
Sanger法測(cè)序的原理就是利用一種DNA聚合酶來延伸結(jié)合在待定序列模板上的引物，直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測(cè)定由一套四個(gè)單獨(dú)的反應(yīng)構(gòu)成，每個(gè)反應(yīng)含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸，并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3'-OH基團(tuán)，使延長(zhǎng)的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止,終止點(diǎn)由反應(yīng)中相應(yīng)的雙脫氧而定。