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            技術(shù)文章

            細胞免疫染色復(fù)染

            閱讀:836          發(fā)布時間:2011-3-24
             
                復(fù)染常有助于在細胞免疫染色中鑒別不同的細胞類型,或者亞細胞結(jié)構(gòu)。這對組織切片來說是基本步驟,并可鑒定細胞的類型。也可用于其他染色反應(yīng)。復(fù)染不能使用熒光染料,因其復(fù)染后可產(chǎn)生自發(fā)熒光。為了選擇一種適宜的復(fù)染方法,首先應(yīng)檢測細胞染色試劑是否在乙醇中可溶。
             
                1.不溶于乙醇的方法
                (1)用水輕輕洗滌標(biāo)本片;
                (2)加數(shù)滴Harris蘇木精(商品化試劑)于標(biāo)本中,孵育約5min。染色時間的長短決定染色的強度;
                (3)用水輕輕洗滌;
                (4)用0.5%冰乙酸/99.5%乙醇處理標(biāo)本片大約10rain;
                (5)用水輕輕洗滌;
                (6)用DPX封片。
             
                2.溶于乙醇的方法
                (1)用水輕輕洗滌標(biāo)本片;
                (2)加數(shù)滴Mayer蘇木精(商品化試劑)至標(biāo)本片,孵育大約5min,染色時間的長短決定染色的強度;
                (3)用水輕輕洗滌;
                (4)用30mm01/L氫氧化銨重復(fù)處理標(biāo)本片
                (5)用水輕輕洗滌;
                (6)用Gelvat01或MOWi。1封片。

            復(fù)染
            推薦用法
            需準備試齊
            優(yōu)    點
            缺    點
            蘇木精
            可用于黑色或棕色染料;用于核或細胞質(zhì)抗原染色
            可購買
            可保存的信息量大;核大
            染色很暗,不適合弱抗原信號的顯示
            甲基綠
            可用黑色或棕色染色,用于核抗原染色
            貯存液二1%甲基綠溶于100mmol/L    酸鈉(pH5.5);工作液為0.1%
            染色淺,適用于弱抗原信號,胞質(zhì)大
            獲得的組織或細胞精細資料有限
            堅固紅
            用于藍色染色或LacZ檢測,可用于核或細胞質(zhì)抗原染色
            可購買
             
            著色很淺,獲得的組織或細胞精細資料有限

             

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