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特異性神經(jīng)元抗核抗體(Hu抗體)的檢測(cè)
閱讀:640 發(fā)布時(shí)間:2011-6-30某些神經(jīng)系統(tǒng)綜合征是由于惡性腫瘤的遠(yuǎn)隔影響所造成,稱為神經(jīng)系統(tǒng)副腫瘤綜合征(paraneoplasticsyndromesofthenervoussystem,PNSNS)。近年來(lái)由于發(fā)現(xiàn)了特異性的神經(jīng)元抗核抗體(Hu抗體),因而認(rèn)為此病與自身免疫有關(guān)。Hu抗體實(shí)質(zhì)上為多克隆IsC,能固定補(bǔ)體,可與中樞神經(jīng)系統(tǒng)及周圍神經(jīng)系統(tǒng)中所有神經(jīng)元胞核及小細(xì)胞肺癌細(xì)胞核起反應(yīng),但不與其他組織細(xì)胞(如腦膠質(zhì)細(xì)胞,肝、腎等組織細(xì)胞)發(fā)生反應(yīng),并與SLE等結(jié)締組織疾病所產(chǎn)生的非特異性抗核抗體有本質(zhì)上的差別,因此,稱為特異性神經(jīng)元抗核抗體(Hu抗體)。采用免疫熒光、ELISA法即可測(cè)出患者血清中Hu抗體。陳齊鳴等(1996)報(bào)道采用先進(jìn)的親合免疫細(xì)胞組織化學(xué)ABC法和免疫印跡技術(shù)檢測(cè)PNSNS患者的Hu抗體,其敏感性和特異性顯著增高。現(xiàn)介紹親合免疫細(xì)胞組織化學(xué)ABC法檢測(cè)Hu抗體。
1.操作步驟
(1)6/1m正常人大腦額葉、顳葉、肝臟、腎臟及Wistar大鼠的大腦、小腦的冰凍切片干燥10min。
(2)丙酮固定10min后用含0.3%H202、1%BSA的PBS處理10min,抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。
(3)加10%羊血清/PBS封閉30min后,分別加稀釋的血清、腦脊液或尿液標(biāo)本在4℃冰箱過(guò)夜。
(4)PBS洗5min,更換3次,以下同。加適度稀釋的生物素標(biāo)記羊抗人IeC(第二抗體),37℃孵育15min。
(5)同上洗滌,加ABC復(fù)合物室溫作用15min。
(6)同上洗滌,DAB-H202底物顯色后,常規(guī)封片鏡檢。
2.結(jié)果顯示
(1)PNSNS患者的血清、腦脊液及尿液中的Hu抗體與正常人和Wistar大鼠所有神經(jīng)組織中的神經(jīng)元胞核形成均勻染色,核仁陰性,但不與神經(jīng)組織中的膠質(zhì)細(xì)胞、肝臟及腎臟組織細(xì)胞發(fā)生反應(yīng),說(shuō)明該法具有高度特異性。
(2)血清及腦脊液中Hu抗體的滴度zui高可達(dá)1:64 000及1:4 000,尿液中Hu抗體滴度達(dá)到1:200,說(shuō)明該法敏感性很高。
(3)以免疫印跡技術(shù)測(cè)得17例患者血清中的抗體識(shí)別神經(jīng)元胞核中蛋白抗原分子量為350-400kD。
3.臨床意義 通常認(rèn)為,IgC不能從腎小球?yàn)V過(guò),尿中測(cè)出IgC型Hu抗體,可能是Hu抗體損害了腎小球,使其通透性增加所致。腦脊液Hu抗體滴度與血清中的抗體滴度無(wú)關(guān)聯(lián),提示可能有CNS中的局部合成。有76%(13/17)患者以PNSNS起病,并檢出Hu抗體,爾后發(fā)現(xiàn)原發(fā)灶,說(shuō)明Hu抗體的測(cè)定對(duì)于部分癌腫,特別是小細(xì)胞肺癌的早期診斷有實(shí)際臨床意義。
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