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            公司動(dòng)態(tài)

            重組質(zhì)體的限制酶分析

            閱讀:592          發(fā)布時(shí)間:2010-12-3
                儀器用具:
                微量離心機(jī)
                冰浴
                Mupid II 迷你電泳槽及鑄膠器
                UV transilluminator 及影像分析系統(tǒng)
                防護(hù)面罩
             
                藥品試劑:
                限制酶:BamHI, HindIII (20 U/μL, BioLabs)
                10×NE Buffer BamHI (0.1 M Tris-HCl, pH 7.9; 0.1 M MgCl2; 1.5 M NaCl; 10mM dithiothreitol)
                100×BSA (10 mg/mL bovine serum albumin) 使用前稀釋十倍成10×無(wú)菌水
             
                方法步驟:
                1) 正反應(yīng)株,接種于3 mL LB/Amp 培養(yǎng)基,于37℃震蕩培養(yǎng)過(guò)夜后,以2.1 的方法抽取質(zhì)體。
                2) 每一株每反應(yīng)各取3 μL 質(zhì)體,另取pQE31 及pBlueGus 每反應(yīng)各3 μL,分別依下表進(jìn)行HindIII 及BamHI 切割。
                3) 以1% agarose gel 進(jìn)行電泳分析,由電泳圖譜挑選帶有gus DNA 片段的重組質(zhì)體。
            ??  照相后的電泳膠片不要丟掉,可繼續(xù)進(jìn)行Southern 轉(zhuǎn)印。
                限制酶分析請(qǐng)依照下列表格加入:

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