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肉毒梭菌分離培養(yǎng)方法
閱讀：2742 發(fā)布時(shí)間：2011-1-181，采樣及處理
肉毒梭菌中毒診斷采樣，要采取病人或病畜的血清和糞便、可疑食物、飲料或飼料水以及土壤等；如為創(chuàng)傷感染，除可采取血清、糞便外，還可采取創(chuàng)傷局部的滲出液、切除組織等。能采得血清10ml以上；食品、飼料、糞樣、土壤等25～50g。
固體檢樣取來后，應(yīng)浸于等量無菌磷酸鹽一明膠緩沖液中（明膠29g磷酸氫二鈉4z，蒸餾水1000ml，pH6．2。高壓滅菌后貯于4~C備用），迅速送檢。灌腸、火腿、罐頭肉晶等檢樣取來切成小塊，與等量磷酸鹽-明膠緩沖液研磨成勻漿，供接種用。
2．增菌培養(yǎng)
可選用庖肉培養(yǎng)基、肝塊肉湯、TPGY肉湯和改良的厭氧菌培養(yǎng)基。具體操作方法為，先將培養(yǎng)基隔水煮沸10一15min，驅(qū)氧并迅速冷卻。以1～28固體檢樣或1～2mi檢樣乳懸液接種2管增菌培養(yǎng)基中，置35~C培養(yǎng)。同時(shí)如法再接種2管置于26~C培養(yǎng)。5天后觀察培養(yǎng)物渾濁度，有無氣體產(chǎn)生，氣味及肉渣的消化情況，并涂片鏡檢，此時(shí)可檢測(cè)毒素。
3．分離培養(yǎng)
可選用葡萄糖血瓊脂、腦、心浸湯瓊脂、D-環(huán)絲氨酸血瓊脂、肝-肉-蛋黃瓊脂等。具體操作是待增菌培養(yǎng)物中芽抱生長zui旺時(shí)期，可取1-2ml出現(xiàn)芽孢的培養(yǎng)物置于小試管中。加等量濾過滅菌的乙醇，混勻，放置室溫中1h，再劃線于分離平板上，厭氧環(huán)境下35~C培養(yǎng)48h后觀察。血平板上可產(chǎn)生溶血環(huán)。菌落邊緣不齊，灰白色，表面粗糙如毛玻璃樣，4天后菌落直徑可達(dá)到5-10mm。庖肉基中A型、B型、F型菌可消化肉渣，變黑并有腐敗惡臭味。
4．鑒別培養(yǎng)
J，C Silas（1985）介紹，將分離菌的生長物劃線或點(diǎn)種于肉毒梭菌鑒別培養(yǎng)上，在厭氧環(huán)境中37~C培養(yǎng)24-48h后，用噻嗪紅染色5min，繼之用3％冰醋酸沖洗，觀察菌落周圍的沉淀反應(yīng)，生成紅色暈環(huán)者為肉毒梭菌。