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質(zhì)體DNA 酵解反應(yīng)與洋菜膠體電泳分析
閱讀：681 發(fā)布時間：2010-7-7本實驗以BamHI 與HindIII 酵解pBlueGus，并以洋菜電泳分析產(chǎn)物。
儀器用具：微?離心機(jī);37℃恒溫水槽;Mupid II 迷你電泳槽及鑄膠器;UV transilluminator;防護(hù)面罩;拍?得相機(jī)
藥品試劑：
質(zhì)體pBlueGus DNA ;限制酶BamHI 與HindIII （Roche）;10×Reaction buffer 2 （Roche）;10×Reaction buffer 3 （Roche）;Agarose;1×TAE 電泳緩沖液;DNA分子?標(biāo)記 （??DNA/HindIII 或100 bp ladder, 0.5 μg/mL）;10×追蹤染劑 （0.25% bromophenol blue; 0.25% xylene cyanol; 0.1 M EDTA;50% glycerol）;Ethidium bromide （500 μg/mL）;拍?得667 底片
方法步驟：
1） 取兩支1.5 mL微?離心管，分別標(biāo)示為 #1 與 #2 的后，依下表所?順序，
逐一加入酵解反應(yīng)所需各項物質(zhì) （體積單位為 μL）。注意：應(yīng)等所有成份?加?的后，再加入限制酶。
2） 以手指頭輕彈微?離心管，以?均勻混合管中各項物質(zhì)。
3） 離心數(shù)秒后，放置于37℃恒溫水槽作用1~2 h。
4） 請?用這一段時間參照『基本操作技術(shù)』所描述的步驟準(zhǔn)備一片1.2%洋菜膠體。
?? Ethidium bromide 是強(qiáng)?致癌物質(zhì)，嚴(yán)禁戴著手套到處?摸！
5） 自恒溫水槽取出微?離心管，離心數(shù)秒后暫存冰中備用。
6） 擬進(jìn)?電泳分析時，請拿出3 支1.5 mL 微?離心管，分別標(biāo)示為 #1, #2與 #3，并依下表所示在各離心管逐一加入適?的DNA 與10×追蹤染劑（體積單位為 μL）。
7） 把膠片移至電泳槽，注入適?電泳緩沖液，以微?移液器P20 逐一將樣本
吸入注出數(shù)次使混合均勻，并小心注入膠片的樣本槽中。
8） 接好電極線以定電壓100 V 進(jìn)?電泳，待追蹤染劑移動至膠體三分的二處時，關(guān)閉電源，將膠體移至UV transilluminator box，以拍?得相機(jī)拍照 。
?? DNA泳動方向為 （-） 向 （+）。 此外，在UV transilluminator box上直接觀察DNA色帶時，沒戴眼鏡的同學(xué)應(yīng)戴上護(hù)目鏡或面罩，以避免UV灼傷；含有ethidium bromide的洋菜膠體請丟至容器中！