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            上海源葉生物科技有限公司>公司動態(tài)>gⅥ-cDNA噬菌粒文庫小規(guī)模的獲取和純化

            公司動態(tài)

            gⅥ-cDNA噬菌粒文庫小規(guī)模的獲取和純化

            閱讀:702          發(fā)布時間:2010-7-26

            [器材和試劑]
            ●通用設(shè)備及試劑以及以下的設(shè)備和試劑:
            ●無菌96孔帶蓋培養(yǎng)板(Costar)
            ●LBAT
            ●R408輔助噬菌體(Stratagene)
            ●振蕩孵育箱
            ●96孔復(fù)制板
            ●PEG/NaCl(
            ●PBS

            [方法]
            1.將克隆體接種到100ul LBAT 96孔培養(yǎng)板上,并在37℃過夜振蕩培養(yǎng)(180r/min)。
            2.使用96孔復(fù)制板將其接種到裝有200ul LBAT的第二塊96孔培養(yǎng)板上,在37℃培養(yǎng)直到生長中期(大約1,5小時)。
            3.在每一孔中加入10ul 2×1011TU/mlR408輔助噬菌體。
            4.37℃無振蕩培養(yǎng)30分鐘。
            5.37℃過夜振蕩培養(yǎng)。
            6.4℃800g離心20分鐘,收集細(xì)胞。
            7.將上清液轉(zhuǎn)移到一新的96孔培養(yǎng)板上,并加40pul PEG/NaCl。
            8.將板放置于冰上1小時。
            9.4℃800g離心20分鐘,收集噬菌體顆粒,小心除去上清液,在50ulPBS溶液中打散顆粒。

             

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