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            上海源葉生物科技有限公司>公司動態(tài)>用免疫親和反應(yīng)選擇gⅥ—cDKA噬菌體文庫

            公司動態(tài)

            用免疫親和反應(yīng)選擇gⅥ—cDKA噬菌體文庫

            閱讀:809          發(fā)布時間:2010-7-26

            [器材和試劑]
            ●PBST
            ●牛血清蛋白(BSA)(Sigma)
            ●抗血清及gⅥ—cDNA噬菌體文庫
            ●無菌15ml聚丙烯管(Falcon)
            ●立式旋轉(zhuǎn)機
            ●蛋白A—瓊脂糖凝膠珠(Amersham Biosciences)
            ●無菌0.1mol/L鹽酸甘氨酸,pH 2.2加0.1%(w/v)BSA
            ●無菌2mol/LTris堿(未調(diào)節(jié)pH)
            ●于板*0F,
            ●37℃培養(yǎng)箱
            ●LB
            ●LBAT平板
            ●無菌直徑為16mm或18mm的培養(yǎng)管
            ●37℃振蕩培養(yǎng)箱

            [方法]
            1.用10m1含1%(w/v)BSA的PBST稀釋2.5ul抗血清,并倒入15ml聚丙烯管中,再加入1011~1012TU的gⅥ—cDNA噬菌體文庫。
            2.室溫下緩慢旋轉(zhuǎn)孵育該混合物1小時。
            3.往混合物中加500ul 1/1(體積比)蛋白A—瓊脂糖凝膠珠漿[在PBST用5%(w/v)BSA預(yù)處理],在室溫下再孵育l小時。
            4.離心(500g 5分鐘)收集蛋白A—瓊脂糖凝膠珠并且用10ml PBST沖洗蛋白A—瓊脂糖凝膠珠10次。
            5.在1ml PBST溶液中打散蛋白A—瓊脂糖凝膠珠,將混合物轉(zhuǎn)移到微離心管中并旋轉(zhuǎn)(10000g 10秒),除去上清液。
            6.0.5m1 0.1mol/L鹽酸甘氨酸,pH 2.2,并加入0.1%(w/v)BSA溶液中打散蛋白A—瓊脂糖凝膠珠。
            7.室溫下孵育樣品10分鐘。
            8.快速離心樣品(10000g 10秒)并將上清液轉(zhuǎn)移到一新的微離心管中。
            9.加30ul 2mol/LTrls中和該溶液,在冰浴中保存溶液。
            10.噬菌體擴增,將抽提出來的一半噬菌體(256ul)加到平板Topl0F’細胞中。37℃溫育30分鐘。

             

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