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巨細(xì)胞病毒抗體IgG（CMVAb-IgG）檢測(cè)
閱讀：1258 發(fā)布時(shí)間：2010-8-10
巨細(xì)胞病毒抗體IgG（CMVAb-IgG）檢測(cè)
[測(cè)定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 在微孔表面包被純化的巨細(xì)胞病毒抗原。被稀釋過(guò)的患者血清加入微孔中。如存在巨細(xì)胞病毒抗體-IgG可與微孔上抗原相結(jié)合。然后洗去未結(jié)合物質(zhì)，再加入酶聯(lián)液，與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。洗去過(guò)量的酶聯(lián)液。zui后加入底物和色原（顯色液）。在特定時(shí)間終止酶聯(lián)液的催化反應(yīng)。所產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度與標(biāo)本中巨細(xì)胞病毒抗體-IgG含量呈正相關(guān)。通過(guò)酶標(biāo)儀與校正和對(duì)照相比，讀出結(jié)果。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml，不抗凝。
[試劑]
1．微孔板
2．樣品稀釋液
3．HRP-抗人IgG酶結(jié)合物
4．陰性對(duì)照
5．陽(yáng)性對(duì)照
6．洗滌劑
7．TMB顯色液
8．終止液
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。
[測(cè)定步驟]
1．吸取5u1血清標(biāo)本加入250gl標(biāo)本稀釋液中，做1：51稀釋。
2。吸取l00ull稀釋過(guò)的血清、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和校正液（不稀釋），加人微孔板內(nèi)，設(shè)空白對(duì)照l孔。振蕩，混勻，去除孔內(nèi)液體中氣泡，室溫環(huán)境中孵育20min。
3，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗5次。
4。每孔再加入100gl酶聯(lián)結(jié)合物，室溫環(huán)境中孵育20min。
5。棄去孔中酶聯(lián)液，用洗滌液洗5次。
6，每孔加入100ul TMB顯色液，室溫環(huán)境中孵育10min。
?。每孔加入100ul終止液，終止反應(yīng)，充分混勻。
8。用酶標(biāo)儀（波長(zhǎng)為450nm）讀取吸光度。以待測(cè)樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽(yáng)性。
[注意事項(xiàng)]
1．整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊(cè)和生物安全守則規(guī)定，嚴(yán)防交叉污染。
2．所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
3．試劑應(yīng)保存于2～8℃冰箱，使用前應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min。
4．洗滌時(shí)各孔均應(yīng)加滿洗滌液，防止孔內(nèi)有游離酶未洗凈，每次洗板后均應(yīng)在吸水紙上拍干。
5．血標(biāo)本應(yīng)分離出血清保存，2～8℃可保存?d，冷凍保存可至6個(gè)月，避免反復(fù)凍融。
6．試劑在儲(chǔ)存或使用過(guò)程中，禁止過(guò)熱、曝曬或強(qiáng)光。
[正常參考值] CMVAb—IgG陰性
[臨床意義] 巨細(xì)胞病毒可引起先天性和后天性多種感染。原發(fā)性感染可引起肝炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥或輸血后綜合征。宮內(nèi)感染則是由于孕婦體內(nèi)的CMV通過(guò)胎盤使胎兒在宮內(nèi)受染所致，是人巨細(xì)胞病毒感染的重要途徑之一。受染胎兒多數(shù)為隱性感染，但有時(shí)后果較為嚴(yán)重，尤其是在懷孕早期，更易造成胎兒損害。出現(xiàn)小頭畸形、肢體畸形、先天性心臟病、斜眼、失明、流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)等。
CMVAb—IgM陽(yáng)性表明新近存在CMV感染，對(duì)于嬰幼兒患者可用于早期診斷。由于孕婦外周血IgM型抗體不能通過(guò)胎盤屏障，所以若新生兒臍血CMVAb—IgM檢測(cè)陽(yáng)性則可診斷CMV宮內(nèi)感染（采集臍血標(biāo)本時(shí)應(yīng)注意避免母血污染）。嬰幼兒外周僅血清單—CMV Ab-IgM檢測(cè)陽(yáng)性者，應(yīng)連續(xù)隨訪6～12個(gè)月，觀察其滴度是否有顯著意義的升高。成人人群中CMV Ab-IgG檢出率很高，CMVAb-IgG僅用于成人流行病學(xué)調(diào)查。
另外，少部分患者再次感染巨細(xì)胞病毒時(shí)，可再次出現(xiàn)CMVAb-IgM陽(yáng)性。特別是器官移植患者再次發(fā)生CMV感染時(shí)，CMVAb-IgM重新出現(xiàn)陽(yáng)性的比例非常高。