酶標(biāo)板與多孔細(xì)胞培養(yǎng)板的差別
用多空細(xì)胞培養(yǎng)板測(cè)吸光度肯定可以拉，我們經(jīng)常用它來做樣品的蛋白定量和MTT檢測(cè)。
區(qū)別：酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴，細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng)，但也可以用來測(cè)蛋白濃度；酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板，一般不能用做細(xì)胞培養(yǎng)，它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測(cè)，它需要更高的要求還需要特定的酶標(biāo)工作液。如下是個(gè)用酶標(biāo)板檢測(cè)冠狀病毒IgM/IgG抗體例子：
【操作步驟】
1．加樣品：將標(biāo)本稀釋液100ul（或2滴）加到包被板內(nèi)（預(yù)留陰陽性及空白對(duì)照2－5孔），將待檢血清用PBS或生理鹽水按1：20稀釋后取10ul加入反應(yīng)孔內(nèi)。
2．加對(duì)照：加入陰性對(duì)照1－3孔，陽性對(duì)照1孔，各100ul對(duì)照血清?？瞻讓?duì)照1孔空置。
3．溫育：將反應(yīng)板震蕩使樣品混勻后，置37℃溫箱或水浴反應(yīng)20分鐘。
4．洗板：用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml。
（1）手洗：將反應(yīng)板孔內(nèi)容物傾出，將洗滌液注滿反應(yīng)孔，放置30秒鐘后用力甩去，如此重復(fù)5次后拍干。
（2）機(jī)洗：5次，每孔注入洗滌液200ul或注滿，停留30秒鐘后吸盡拍干。
5．加酶標(biāo)工作液：每孔加入100ul（或2滴）酶標(biāo)工作液，置37℃溫箱反應(yīng)20分鐘后，洗板5次，洗板操作同步驟4。
6．顯色和終止反應(yīng)：將底物A、B液各50ul（或1滴）加到反應(yīng)孔內(nèi)，37℃避光顯色10分鐘。每孔加入終止液50ul（或1滴）混勻終止反應(yīng)。
【結(jié)果判定】
1．酶標(biāo)儀設(shè)定波長(zhǎng)450nm，先用空白調(diào)零，然后測(cè)定各孔OD值；如果選用雙波長(zhǎng)測(cè)定，不必設(shè)置空白對(duì)照孔。
2．當(dāng)陰性對(duì)照平均OD值小于0.08，陽性對(duì)照（pc）OD值大于0.30時(shí)，說明試劑盒有效且實(shí)驗(yàn)操作正確，否則應(yīng)當(dāng)重復(fù)試驗(yàn)。
3．臨界值（CUT—OFF VALUE）＝0.15＋陰性對(duì)照平均（NC）OD值（當(dāng)陰性平均OD值小于0.05時(shí)，按0.05計(jì)算；當(dāng)陰性平均OD值大于或等于等于0.05時(shí)按實(shí)際值計(jì)算）。
4．標(biāo)本OD值≤臨界值為陰性，標(biāo)本OD值>臨界值為陽性
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