小鼠脂聯(lián)素ELISA試劑盒
特異性： 沒有檢測到與任何其他細胞因子的交叉反應性。
儲存： 存放在4 ℃ 的頻繁使用，在-20 ℃ 很少使用。 避免多次凍融循環(huán)（隨用濕冰）
有效期： 4個月，在4 ℃ 和8個月，在-20 ℃ 。
應用： 用于定量檢測小鼠脂聯(lián)素，血清，血漿，體液，組織裂解物或細胞培養(yǎng)上清。
注意事項應用套件
1 。在使用試劑盒，旋轉(zhuǎn)管到管底，并關閉所有元件。
2 。重復以及檢測標準和樣品測試。
3 ，不要讓96孔板中干，干板將活性成分失活板。
4 。為了避免邊際效應的板孵化，由于溫度差（反應可能會更強的邊際井），ABC和TMB的解決方案攤薄預先加熱，在37 ℃ 30分鐘前使用。
工具包組件
1。凍干重組小鼠脂聯(lián)素標準：10ng/tube×2。
2。一個96孔板預涂與抗小鼠脂聯(lián)素抗體。
3。樣品稀釋緩沖液：30毫升
4。生物素標記的抗小鼠脂聯(lián)素抗體130μl稀釋1:100。
5?？贵w稀釋緩沖12毫升。：
6。親和素 - 過氧化物酶復合物（ABC）：130μl稀釋1:100。
7。ABC稀釋劑的緩沖區(qū)：12毫升。
8。TMB顯色劑：10毫升。
9。TMB一站式解決方案：10毫升。
材料需要但不提供：
1。酶標儀標準尺寸。
2。自動洗板機。
3。可調(diào)式移液器及吸頭。多道移液器建議中的條件在檢測大量的樣品。
4。清潔管和Eppendorf管中。
5。洗滌緩沖液（中性PBS或TBS）。
0.01M TBS的制備：添加1.2克的Tris8.5克氯化鈉;450μl純化的乙酸或700μl濃鹽酸1000ml H 2 Ø，并調(diào)節(jié)pH值7.2-7.6。后，調(diào)整1L總體積。
下游的0.01M PBS：上傳8.5克氯化鈉，1.4克的Na 2 HPO 4 和0.2g的NaH 2 PO 4 1000ml蒸餾水，并調(diào)節(jié)pH值7.2-7.6。后，調(diào)整1L總體積。
實驗步驟
ABC工作液和TMB彩色顯影劑必須在使用前30分鐘在37℃下保溫。稀釋樣品和試劑時，必須將它們*和均勻地混合。標準小鼠脂聯(lián)素檢測曲線。用戶將決定樣品稀釋倍數(shù)的粗略的估計。
1。的分裝0.1毫升每20ng/ml，10ng/ml時，5ng/ml，2.5ng/ml，1.25ng/ml，0.625ng/ml，0.312 ng / ml的小鼠脂聯(lián)素標準的解決方案，預涂96板。添加0.1ml的樣品稀釋緩沖液到控制（零井）。添加0.1ml的每個適當稀釋的人血清樣品，血漿，體液，組織裂解物或細胞培養(yǎng)上清液中的每個空井。請參見“示例稀釋指引“上面的內(nèi)容，我們建議每個小鼠脂聯(lián)素標準溶液和每個樣品一式兩份測定。
2。密封板與蓋和在37℃下孵育90分鐘。
3。取下蓋子，舍棄板的內(nèi)容，涂抹到紙巾或其它吸水材料板。不要讓我們的井*干燥，在任何時候。
4。添加生物素標記的抗0.1ml的 孵化板在37℃下60分鐘。
5。三次用0.01M TBS或0.01M PBS洗板，每一次讓留在洗滌緩沖液井1分鐘。棄去洗滌液，或其他吸水紙巾上吸干板材料。
6。導入各孔中，并加入0.1ml的制備ABC工作液，在37℃下孵育板30分鐘。
7。將板洗滌5次，用0.01M TBS或0.01M PBS，每一次讓洗滌緩沖液的孔中逗留1-2分鐘。棄去洗滌液和紙巾或其它吸水材料上涂抹板。
8。90微升制備TMB底彩色顯影劑添加到每個孔中并孵育板在37℃下20分鐘（深淺不一的藍，可以看出，在井的四個集中的脂聯(lián)素標準的解決方案;其他井沒有明顯的顏色）。
9。每孔加入0.1ml的準備TMB的一站式解決方案。顏色立即變成黃色。
10。閱讀的OD在酶標儀在450nm處的吸光度，添加停止溶液后，在30分鐘之內(nèi)。
為了計算，（相對OD 450 ）=（的OD 450 ） - （的OD 450 ）?？梢岳L制成的相對OD 標準曲線。的小鼠脂聯(lián)素濃度的樣品可以被內(nèi)插。
注：如果測量的樣品進行稀釋，稀釋前，乘以稀釋倍數(shù)的濃度插值獲得的濃度。
摘要
1。加入樣品和標準品，并在37℃下孵育板90分鐘。不要洗。
2。添加生物素化的抗體，并在37℃下孵育板60分鐘。將板洗滌3次，用0.01MTBS。
3。加入ABC工作液，并在37℃下孵育板30分鐘。將板洗滌5次，用0.01MTBS。
4。加入TMB底彩色顯影劑，并在37℃下孵育板20分鐘。
5。加入TMB一站式的解決方案和閱讀。
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