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磷酸化的 和 非磷酸化的 抗體 有什么區(qū)別？

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后者是測該蛋白的含量，不能知道其活性狀態(tài)，前者是測該蛋白的磷酸化水平如何，側(cè)重于了解該蛋白的一種活性狀態(tài)。很多信號通路的蛋白在受到某些刺激后都是通過改變其磷酸化水平的改變而引起細(xì)胞的一系列反應(yīng)，其蛋白含量并不見得會有多大的變化。 

先要說明的就是檢測的蛋白質(zhì)在你檢測的組織或者細(xì)胞中是表達(dá)的,根據(jù)該蛋白質(zhì)的功能狀態(tài)(磷酸化還是非磷酸化)的需要,調(diào)控該蛋白質(zhì)活性的酶(即蛋白磷酸酶(去磷酸化)或蛋白激酶(磷酸化))對其進(jìn)行調(diào)空,因此當(dāng)細(xì)胞受到刺激時,通過信號級聯(lián)通路可能會增強(qiáng)目的蛋白的磷酸化水平或者磷酸化水平減弱,所以: 

1.磷酸化抗體主要是針對磷酸化位點(diǎn)制備的,檢測該蛋白在細(xì)胞受到刺激時該蛋白的變化情況(磷酸化水平增強(qiáng)還是減弱); 

2.非磷酸化抗體(主要針對非磷酸化位點(diǎn)的肽段制備的)主要檢測組織或細(xì)胞中該蛋白的表達(dá)情況,組織分布或細(xì)胞中定位,同時可以作為磷酸化水平變化的內(nèi)參等.

區(qū)別在于： 

1.磷酸化抗體的檢測的是出于活性狀態(tài)（磷酸化）的蛋白 

2.磷酸化抗體只針對磷酸化位點(diǎn)設(shè)計，是一種位點(diǎn)特異性的多抗，這到有些單抗的特性。 3.普通抗體的合成（多抗）：原核表達(dá)蛋白->純化->免疫動物->收獲抗體 

4.磷酸化抗體合成：人工合成含磷酸化位點(diǎn)的多肽->人工體外磷酸化->鏈接半抗原->免疫動物->收獲抗體 

5.磷酸化的蛋白很大部分是轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子。因此使用磷酸化抗體和普通抗體 

檢測同一個蛋白，原位檢測可能具有不同的細(xì)胞定位。轉(zhuǎn)錄因子磷酸化后由細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核。

 6.一般而言，磷酸化蛋白的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分子功能更直接相關(guān)。  

7.也就是說，能使用磷酸化的更好。很多時候是同時使用 

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