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            DMEM培養(yǎng)基的使用方法及特點(diǎn)

            閱讀:3943      發(fā)布時間:2016-6-3
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            DMEM是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基,高糖型有利于細(xì)胞停泊于一個位置生長,適于生長較快、附著較困難腫瘤細(xì)胞等。該類培養(yǎng)基廣泛應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)和各種初代病毒宿主細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)及單一細(xì)胞培養(yǎng);如A9、3T6、BALB/3T3、COS-1、COS-3、COS-7、L6、WEHI-3b等細(xì)胞系的培養(yǎng)。

            DMEM培養(yǎng)基的成分

            DMEM培養(yǎng)基

            DMEM培養(yǎng)基的配制方法:

            1 制備新鮮三蒸水或超純水。

            2 稱取所需量的干粉培養(yǎng)基,加入約終體積一半的三蒸水中;若配制一個包裝的培養(yǎng)液,在將整個包裝的干粉倒入三蒸水后,需用水洗包裝袋內(nèi)面2次,倒入培養(yǎng)液中,以保證所有干粉都溶解成培養(yǎng)液。磁力攪拌或人工攪拌使之*溶解。

            3 根據(jù)包裝袋上的要求補(bǔ)加所需量的碳酸氫鈉;根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,添HEPES(5-20mmol/L)、谷氨酰胺和其他特殊物質(zhì)。

            4 加水定容到終體積。

            5 必要時用1 mol/L 鹽酸和1 mol/L 氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH。

            6 用無菌0.22um濾膜過濾除菌,分裝于無菌血清瓶中,4℃冰箱保存。

            配制好的培養(yǎng)液用前加入100U/mL青霉素和100U/mL鏈霉素,并根據(jù)需要加入血清(5%-20%)。

            DMEM培養(yǎng)基的特點(diǎn):

            (1)氨基酸含量為依格爾培養(yǎng)基的2倍,且含有非必需氨基酸,如甘氨酸等;

            (2)維生素含量為依格爾培養(yǎng)基的4倍;

            (3)含有糖酵解途徑中的重要物質(zhì)——丙酮酸;

            (4)含有微量的鐵離子。

            DMEM培養(yǎng)基應(yīng)用廣泛?;贒MEM培養(yǎng)基中氨基酸、微生物含量豐富,并具有糖酵解中的丙酮酸和微量Fe離子,因此在細(xì)胞培養(yǎng)、疫苗生產(chǎn)等方面的應(yīng)用為常見。

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