目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC1125-100T/96SNADP蘋果酸酶活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
| 貨號 | BC1125 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | 測定意義：ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性 |
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
試劑二：用時加入10 mL提取液充分溶解備用；
試劑三：用時加入用時每支加1 mL雙蒸水充分溶解備用；
試劑四：用時每支加500 μL雙蒸水充分溶解備用；
工作液：在7.5 mL試劑二中加入1 mL試劑三和0.5 mL試劑四，可以根據(jù)比例現(xiàn)用現(xiàn)配。
產(chǎn)品說明：
ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生丙 酮酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng)，是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物ME活性測定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
NADP-ME催化NADP+還原成NADPH，在340nm下測定NADPH增加速率。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：
若A2-A1大于0.5，需將樣本用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。
實(shí)驗(yàn)時，試劑三、試劑四和樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑一37℃或25℃水浴放置。
比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。用96孔板做時盡量保持反應(yīng)溫度在37℃或25℃。
最好兩個人同時做此實(shí)驗(yàn)，一個人比色，一個人計(jì)時，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。用96孔板做時盡量做到樣本反應(yīng)時間一致。
如果ΔA＜0.01，可將反應(yīng)時間延長5分鐘或10分鐘。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
取0.1g肝加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清，按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.8753-0.6389=0.2364，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
NADP-ME（U/g 質(zhì)量）=4823×ΔA÷W=4823×0.2364÷0.1=11401.572 U/g 質(zhì)量。
取0.1g蒜加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清之后按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.1305-0.1081=0.0224，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
NADP-ME（U/g 質(zhì)量）=4823×ΔA÷W=4823×0.0224÷0.1=1080.352 U/g 質(zhì)量。
取10μL馬血清直接按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.0763-0.0738=0.0025，按血清/血漿體積計(jì)算酶活得：
NADP-ME（U/mL）=4823×ΔA=4823×0.0025=12.0575 U/mL。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：
[1] Baohua Zhu,Ruihao Zhang,Nana Lv,et al. The Role of Malic Enzyme on Promoting Total Lipid and Fatty Acid Production in Phaeodactylum tricornutum. Frontier in Immunology. June 2018;(IF4.716)
參考文獻(xiàn)：.
[1] Spampinato C P, Colombo S L, Andreo C S. Interaction of analogues of substrate with NADP-malic enzyme from maize leaves[J]. Photosynthesis research, 1994, 39(1): 67-73.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0260/BC0265 6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）活性檢測試劑盒
BC0400/BC0405 胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）活性檢測試劑盒
BC2100/BC2105 6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6PGDH）活性檢測試劑盒
NADP蘋果酸酶活性檢測試劑盒 微量法 NADP蘋果酸酶活性檢測試劑盒 微量法
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