目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC0535-100T/96S磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
| 貨號 | BC0535 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | PFK（EC 2.7.1.11）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,負責將 |
磷酸果糖激酶（PFK）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0535
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二A | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
| 試劑二B | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
| 試劑二C | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
| 試劑二D | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
| 試劑三 | 液體25μL×1支 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 液體10μL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑二A：臨用前加入1mL蒸餾水，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融；
試劑二B：臨用前加入1mL蒸餾水，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融；
試劑二C：臨用前取一支加入0.5mL蒸餾水，用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復凍融；
試劑二D：臨用前加入1mL蒸餾水，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融；
試劑三：臨用前根據(jù)用量按照試劑三:蒸餾水為1μL:50μL（約5T）的體積比例充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配；
試劑四：臨用前根據(jù)用量按照試劑四:蒸餾水為1μL:125μL（約12T）的體積比例充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配；
工作液的配制：根據(jù)樣本量按試劑一：試劑二A：試劑二B：試劑二C：試劑二D =8mL：0.5mL：0.5mL：0.5mL：0.5mL（約55T）的比例配制工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。
產(chǎn)品說明：
磷酸果糖激酶（Phosphofructokinase，PFK，EC 2.7.1.11）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，負責將果糖-6-磷酸和ATP轉(zhuǎn)化為果糖二磷酸和ADP，是糖酵解過程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶之一。
PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-二磷酸和ADP，丙 酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下測定NADH下降速率，即可反映PFK活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：
測定過程中試劑三、試劑四和樣本在冰上放置，以免變性和失活。
比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準確性。
不同勻漿組織中PFK活性不一樣，若ΔA>0.5，則說明活性太高，必須用提取液稀釋成適當濃度勻漿上清液，或縮短反應(yīng)時間至2min或5min，使ΔA<0.5，以提高檢測的靈敏度。注意同步修改計算公式。
實驗實例：
取0.1g黑麥草加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清之后按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計算ΔA=A1-A2=1.6086-1.2986=0.31，按樣本質(zhì)量計算酶活得：
PFK活性（U/g 質(zhì)量）=535×ΔA÷W=535×0.31÷0.1=1658.5 U/g 質(zhì)量。
取0.1g桃葉加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清之后按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計算ΔA=A1-A2=1.7025-1.6159=0.0866，按樣本質(zhì)量計算酶活得：
PFK活性（U/g 質(zhì)量）=535×ΔA÷W=535×0.057÷0.1=463.31 U/g 質(zhì)量。
參考文獻：
Papagianni M, Avramidis N. Lactococcus lactis as a cell factory: a twofold increase in phosphofructokinase activity results in a proportional increase in specific rates of glucose uptake and lactate formation[J]. Enzyme and microbial technology, 2011, 49(2): 197-202.
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