目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC2625-100T/48Sβ-木糖苷酶活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC2625 | 應用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | 測定意義：β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體,是 |
β-木糖苷酶活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2625
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體100mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
| 試劑二 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑一：臨用前取1支加入0.555 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑建議-20℃分裝保存2周，避免反復凍融（1支粉劑溶解后可做48S，為了延長使用時間，此產(chǎn)品多給1支粉劑）；
標準品：5μmol/mL對硝基 苯*溶液。
產(chǎn)品說明：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應用價值。
β-木糖苷酶催化對硝基 苯*-β-D-木糖苷產(chǎn)生對硝基 苯*，對硝基 苯*在405nm處有特征吸收峰，測定405nm光吸收增加速率，可計算β-木糖苷酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、水浴鍋、蒸餾水、超聲破碎儀。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、植物樣本：稱取約0.1g樣本，加1mL提取液充分冰浴勻漿，然后12000rpm，4℃，離心20min，棄沉淀，取20μL上清測定蛋白含量，剩余上清作為待測酶液。
細菌、真菌樣本：收集約500萬個細胞，加入1mL提取液，超聲波破碎（冰浴，功率200w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000rpm，4℃，離心10min，棄沉淀 ，取20μL上清測定蛋白含量，剩余上清置于冰上待測。
二、測定步驟
可見分光光度計/酶標儀預熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至405nm，分光光度計用蒸餾水調(diào)零。
標準液的稀釋：用試劑二將標準液稀釋至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μmol/mL，稀釋可參考下表。
| 序號 | 稀釋前濃度（µmol/mL） | 標準液體積（µL） | 試劑二體積（µL） | 稀釋后濃度（µmol/mL） |
| 1 | 5 | 40 | 960 | 0.2 |
| 2 | 0.2 | 500 | 500 | 0.1 |
| 3 | 0.1 | 500 | 500 | 0.05 |
| 4 | 0.05 | 500 | 500 | 0.025 |
| 5 | 0.025 | 500 | 500 | 0.0125 |
| 6 | 0.0125 | 500 | 500 | 0.00625 |
備注：實驗中每個標準管需40µL標準溶液。
樣本測定：
| 試劑名稱（μL） | 對照管 | 測定管 | 空白管 | 標準管 | |
| 酶液 | 40 | 40 | - | - | |
| 標準品 | - | - | - | 40 | |
| 試劑一 | - | 10 | - | - | |
| 試劑二 | 80 | 70 | 120 | 80 | |
| 渦旋混勻，置于45℃水浴鍋中反應20min | |||||
| 試劑三 | 80 | 80 | 80 | 80 | |
| 渦旋混勻，室溫靜置5min，微量玻璃比色皿/96孔板，測定405nm吸光值，分別記為A對照、A測定、A空白、A標準。并計算ΔA測定= A測定- A對照、ΔA標準= A標準-A空白。標準曲線和空白管只需測1-2次。每個測定管需設(shè)一個對照管。 | |||||
三、β-木糖苷酶活性計算
根據(jù)標準管的濃度（y，μmol/mL）和吸光度ΔA標準（x，ΔA標準），建立標準曲線。根據(jù)標準曲線，將ΔA測定（x，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（y，μmol/mL）。
1、按樣本蛋白濃度計算：
酶活定義：45℃，pH7.4時，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)催化產(chǎn)生1μmol對硝基 苯 *的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（U/mg prot）=(y×V樣)÷(V樣×Cpr)÷T=0.05×y÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算：
酶活定義：45℃，pH7.4時，每克樣本1min內(nèi)催化產(chǎn)生1μmol對硝基 苯 *的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（U/g 質(zhì)量）＝(y×V樣)÷(W×V樣÷V樣總)÷T=0.05×y ÷W
3. 按細胞數(shù)量計算：
酶活定義：45℃，pH7.4時，每104個細胞1min內(nèi)催化產(chǎn)生1μmol對硝基 苯 *的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（U/104 cell）= (y×V樣)÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.0001×y
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL； V樣：加入反應體系中樣本體積，0.04mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬；T：反應時間，20min。
注意事項：
吸光度變化應該控制在0.05~0.6之間。否則加大樣本量或稀釋樣本，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應改變。
樣本蛋白質(zhì)含量需要另外測定。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0360/BC0365 β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）活性檢測試劑盒
BC2550/BC2555 α-葡萄糖苷酶（α - GC）活性檢測試劑盒
BC2560/BC2565 β-葡萄糖苷酶（β-GC）活性檢測試劑盒
BC2570/BC2575 α-半乳糖苷酶（α-GAL）活性檢測試劑盒
β-木糖苷酶活性檢測試劑盒 微量法 β-木糖苷酶活性檢測試劑盒 微量法
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