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土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF）活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC3990

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：甲苯自備；

2、 試劑三：臨用前取1瓶加入10mL蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝保存一周，避免反復(fù)凍融；

3、 標(biāo)準(zhǔn)品：5mmol/L的對硝基苯*溶液。臨用前用試劑二將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋50倍得100μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。（具體稀釋過程見操作步驟）

產(chǎn)品說明：

土壤芳基硫酸酯酶來自于土壤微生物，能酶促土壤有機(jī)硫化物轉(zhuǎn)化為植物可吸收的無機(jī)態(tài)硫，在硫素的生物化學(xué)循環(huán)和植物的硫營養(yǎng)代謝中具有重要的作用，是反映土壤質(zhì)量的一個重要生物學(xué)指標(biāo)。

S-ASF能夠催化對-硝基苯硫酸鉀生成對-硝基苯*，后者在410nm有特征光吸收。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、臺式離心機(jī)、恒溫水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研缽、冰、30-50目篩、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30-50目篩。

二、測定步驟

1、 分光光度計預(yù)熱30min，波長調(diào)至410nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：取20μL 5mmol/L的對硝基苯*溶液，加入980μL試劑二，充分混勻，配制成100μmol/L標(biāo)準(zhǔn)液待測，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實驗中每管需要500μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）

3、 加樣表：

充分混勻，常溫靜置2min后，吸取1mL反應(yīng)液于1mL玻璃比色皿中，測定吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計算ΔA測定=A 測定管-A對照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需檢測1-2次。

三、S-ASF活力計算

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol對-硝基苯*定義為一個酶活力單位。

S-ASF活力（U/g 土樣）=ΔA測定÷ (ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V反總÷W÷T=2.28×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

T：反應(yīng)時間，1h=1/24d；V反總：反應(yīng)體系總體積：9.5×10^-4L；C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，100μmol/L；W：樣本質(zhì)量，g。

實驗實例：

1、 分別稱取兩管0.1g三葉草土樣，分別記為測定管和對照管，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.627-0.108=0.519，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.568-0.002=0.566，計算酶活得：

S-ASF活力（U/g 土樣） =0.456×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=2.28×0.519÷0.566÷0.1=20.9067 U/g 土樣。

2、 分別稱取兩管0.1g土樣，分別記為測定管和對照管，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.442-0.102=0.34，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.568-0.002=0.566，計算酶活得：

S-ASF活力（U/g 土樣） =0.456×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=2.28×0.34÷0.566÷0.1=13.69611 U/g 土樣。

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