目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC2385-100T/48S肝脂酶（HL）檢測(cè)試劑盒 微量法
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更新時(shí)間：2024-04-16 10:48:05瀏覽次數(shù)：644評(píng)價(jià)
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| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號(hào) | BC2385 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | 測(cè)定意義：肝酯酶是脂肪分解酶,在肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞中合成，存在于肝臟竇周間隙內(nèi)皮細(xì)胞表面 |
肝脂酶（HL）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC2385
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱(chēng) | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體80 mL×1瓶 | |
試劑二 | 液體1.5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、試劑三：臨用前加入10 mL蒸餾水，充分溶解待用，用不完的 2-8℃保存8周；
2、試劑四：臨用前取1支加入1 mL蒸餾水，充分溶解，用不完的試劑可-20℃分裝保存2周，避免反復(fù)凍融；
3、標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入6.94 mL丙 酮，配成10 μmol/mL α-萘酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，充分溶解待用，用不完的-20℃保存4周。
產(chǎn)品說(shuō)明：
肝脂酶（hepaticlipase，HL）是一種脂肪分解酶，在肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞中合成，存在于肝臟竇周間隙內(nèi)皮細(xì)胞表面和竇周間隙腔面的肝細(xì)胞微絨毛表面，可水解各種脂蛋白中的甘油三酯（TG）和磷脂（PL），使各種脂蛋白顆粒的大小和密度發(fā)生變化，當(dāng)血漿中的HL及其活性增高時(shí)，可導(dǎo)致血漿中低密度脂蛋白（LDL）水平升高，加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展。
肝脂酶水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生α-萘酚，可與固藍(lán)B鹽形成紫紅色偶氮化合物，在595nm有特征吸收峰，其顏色深淺在一定范圍內(nèi)與肝脂酶活性成正相關(guān)。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、低溫離心機(jī)、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、EP管、 丙 酮、蒸餾水。
操作步驟：
一、 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1 g，加入1 mL試劑一），加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10 min，取上清待測(cè)。
2、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000︰1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1 mL試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300W，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3 min）；然后于4℃，10000g離心10 min，取上清待測(cè)。
3、血清/血漿：直接測(cè)定。（若液體有渾濁則離心后進(jìn)行測(cè)定）
二、測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至595 nm，分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑三在30℃預(yù)熱20 min以上。
3、 將10 μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液用試劑一稀釋為5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
4、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表
序號(hào) | 稀釋前濃度（µmol/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL） | 試劑一體積（µL） | 稀釋后濃度（µmol/mL） |
1 | 10 | 100 | 100 | 5 |
2 | 5 | 100 | 100 | 2.5 |
3 | 2.5 | 100 | 100 | 1.25 |
4 | 1.25 | 100 | 100 | 0.625 |
5 | 0.625 | 100 | 100 | 0.3125 |
6 | 0.3125 | 100 | 100 | 0.15625 |
7 | 0.15625 | 100 | 100 | 0.078 |
實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需20µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。
5、 操作表（在1.5mLEP管或者96孔板中依次加入下列試劑）：
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
樣本（µL） | 20 | 20 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)溶液（µL） | - | - | 20 | - |
試劑一（µL） | 90 | 80 | 80 | 100 |
試劑二（µL） | - | 10 | 10 | 10 |
混勻，30℃反應(yīng)10 min | - | - | ||
試劑三（µL） | 80 | 80 | 80 | 80 |
試劑四（µL） | 10 | 10 | 10 | 10 |
充分混勻，測(cè)定595 nm處吸光值，分別記為A對(duì)照管、A測(cè)定管、A標(biāo)準(zhǔn)管和A空白管。計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。（每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管，空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次） | ||||
三、HL酶活計(jì)算
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA（y，ΔA）帶入公式計(jì)算樣本濃度（x，μmol/mL）。
2、 HL酶活的計(jì)算：
（1）按蛋白濃度計(jì)算
酶活定義：每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol的 α-萘酚為一個(gè)酶活力單位。
HL活性（U/mg prot）=x×V樣÷（V樣×Cpr）÷T=0.1x÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活定義：每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol的 α-萘酚為一個(gè)酶活力單位。
HL活性（U/g 鮮重）=x×V樣÷（W×V樣÷V樣總）÷T=0.1x÷W
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol的 α-萘酚為一個(gè)酶活力單位。
HL活性（U/104 cell）=x×V樣÷（V樣×N÷V樣總）÷T=0.1x÷N
（4）按液體體積計(jì)算
酶活定義：每毫升血清每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol的 α-萘酚為一個(gè)酶活力單位。
HL活性（U/mL）=x×V樣÷V樣÷T=0.1x
V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02 mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度自行測(cè)定；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入試劑一體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，10 min；N：細(xì)胞數(shù)量，以萬(wàn)計(jì)。
注意事項(xiàng)：
1、 若樣本為動(dòng)物肝臟，建議將樣本用試劑一稀釋25倍以上再進(jìn)行檢測(cè)，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2、 若樣本為肥胖型動(dòng)物血清或血漿，建議將樣本用試劑一稀釋5倍以上再進(jìn)行檢測(cè)，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3、 當(dāng)ΔA大于1.3時(shí)，建議將樣本用試劑一稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、取0.1g大鼠肝臟，進(jìn)行樣本處理，取上清稀釋24倍后按照操作步驟進(jìn)行操作，使用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.605-0.046=0.559，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.265x+0.0033計(jì)算x=2.097，按照樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
HL活性（U/g 質(zhì)量）=x×V樣÷（W×V樣÷V樣總）÷T×24=50.328 U/g 質(zhì)量。
2、取火雞血清稀釋6倍后按照操作步驟進(jìn)行操作，使用96孔板測(cè)得ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.449-0.003=0.446，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.265x+0.0033計(jì)算x=1.671，按照樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
HL活性（U/g 質(zhì)量）=x×V樣÷（W×V樣÷V樣總）÷T×6=1.003 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC2340/BC2345 脂肪酶（LPS）活性檢測(cè)試劑盒
BC0620/BC0625 甘油三酯（TG）含量檢測(cè)試劑盒
BC2440/BC2445 脂蛋白酯酶（LPL）活性檢測(cè)試劑盒
BC0320/BC0325 植物中脂氧合酶（LOX）活性檢測(cè)試劑盒
BC0590/BC0595 游離脂肪酸（FFA）含量檢測(cè)試劑盒
肝脂酶（HL）檢測(cè)試劑盒 微量法 肝脂酶（HL）檢測(cè)試劑盒 微量法
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