目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC4315-100T/48S蔗糖合成酶活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC4315 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | 蔗糖合成酶活性檢測 |
蔗糖合成酶（分解方向；SS-I）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號: BC4315
規(guī)格: 100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體8 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
試劑三 | 液體8 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二：臨用前加入2.5 mL試劑一充分溶解待用，用不完的試劑建議分裝后，-20℃保存，避免反復(fù)凍融；
2、 標準品：20 mg果糖，臨用前加入1 mL蒸餾水溶解，配成20 mg/mL果糖溶液備用，2-8℃保存一周。
產(chǎn)品說明：
蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代謝過程的關(guān)鍵酶，負責催化蔗糖分解與合成的可逆反應(yīng)，其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG與果糖， 參與淀粉、纖維素和半纖維素的合成等代謝途徑。
分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖與UDPG，果糖與3,5 –二硝基水楊酸反應(yīng)生成在540nm有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì)，通過測定540nm處吸光值變化可計算得SS-I活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式低溫離心機、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，8000g，離心10min，取上清置于冰上待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將20mg/mL標準液用蒸餾水稀釋為8、6、5、4、3、2、1mg/mL的標準溶液備用。
3、 操作表 (在1.5mL離心管中操作) ：
試劑名稱（µL） | 對照管 | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣本 | 10 | 10 | - | - |
標準溶液 | - | - | 10 | - |
蒸餾水 | - | - | - | 10 |
試劑一 | 40 | 40 | 40 | |
試劑二 | - | 40 | - | - |
混勻，30℃水浴30 min后，95℃水浴10 min（蓋緊，防止水分散失）。 | ||||
試劑三 | 50 | 50 | 50 | 50 |
混勻，95℃水浴5 min（蓋緊，防止水分散失），冷卻至室溫。 | ||||
蒸餾水 | 400 | 400 | 400 | 400 |
混勻，取200µL置于微量玻璃比色皿或96孔板中，測定540nm處吸光值A，分別記為A對照管，A測定管，A標準管，A空白管。計算ΔA=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管（標準曲線只需檢測1-2次）。 | ||||
三、SS-I活性計算
1、 標準曲線的繪制：
以各個標準溶液的濃度為x軸，其對應(yīng)的ΔA標準為y軸，繪制標準曲線，得到標準方程y=kx+b，將ΔA帶入方程得到x（mg/mL）。
2、 SS-I活性的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算
酶活定義：每mg蛋白每分鐘分解蔗糖產(chǎn)生1µg果糖為1個酶活力單位。
SS- I酶活（U/mg prot）=x×V提取÷（V提取×Cpr）×103÷T=33.33x÷Cpr。
（2）按樣本質(zhì)量計算
酶活定義：每g樣本每分鐘分解蔗糖產(chǎn)生1µg果糖為1個酶活力單位。
SS- I酶活（U/g質(zhì)量）=x×V提取×103÷W÷T=33.33x÷W。
V提取：提取液體積，1mL；103：單位換算系數(shù)，1mg=103µg；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度自行測定；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間：30min。
注意事項：
1. 當A或ΔA超過1.5時，建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定，計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2. 95℃水浴時EP管蓋緊，防止水分散失，待冷卻至室溫后（建議每次實驗后冷卻時間保持一致），再進行下一步操作，避免液體飛濺燙傷以及影響試驗數(shù)據(jù)。
實驗實例：
1. 取0.1g黑麥草加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，用96孔板測得A對照管=0.111，A測定管=0.408，標準曲線y =0.1231x-0.0365，A空白管=0.050，計算ΔA=A測定管-A對照管=0.408-0.111=0.297，x= (0.297+0.0365) ÷0.1231=2.7092，按樣本質(zhì)量計算酶活得：
SS-I酶活（U/g質(zhì)量）=33.33x÷W=33.33×2.7092÷0.1= 902.976 U/g質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0580/BC0585 蔗糖合成酶（SS）活性檢測試劑盒
BC0600/BC0605 蔗糖磷酸合成酶（SPS）活性檢測試劑盒
BC0570/BC0575 中性轉(zhuǎn)化酶（NI）活性檢測試劑盒
BC2460/BC2465 植物蔗糖含量檢測試劑盒
蔗糖合成酶活性檢測試劑盒 微量法 蔗糖合成酶活性檢測試劑盒 微量法
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